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生長(zhǎng)能力的檢查是指采用低菌量的特定菌種挑戰(zhàn)培養(yǎng)基的菌落回收率，一般而言所謂低菌量是指至少<100 CFU，而所謂特定菌種是指藥典規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)菌株、控制菌以及不合宜微生物(objectionable)。無(wú)論滋養(yǎng)性培養(yǎng)基(例如TSA)或是選擇性培養(yǎng)基(例如麥康凱瓊脂，MacConkey agar)都需要執(zhí)行生長(zhǎng)能力的檢查，然而對(duì)于選擇性培養(yǎng)基來(lái)說(shuō)，由于目標(biāo)菌的回收率常常低于滋養(yǎng)性培養(yǎng)基，因此國(guó)際藥典并未針對(duì)選擇性培養(yǎng)基的回收率有明確的要求(非強(qiáng)制>50%)，但是對(duì)于選擇性培養(yǎng)基的抑制能力與指示能力則有特別要求。操作這三種培養(yǎng)基效能檢查時(shí)，必須注意到接種菌株種類、培養(yǎng)與觀察時(shí)間的要求是不同的。舉例來(lái)說(shuō)，生長(zhǎng)能力的檢查必需在藥典規(guī)定的最低時(shí)間內(nèi)完成培養(yǎng)；抑制能力的培養(yǎng)時(shí)間則不低于藥典規(guī)范的最長(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)；抑制能力須接種>100 CFU（常用的濃度為1,000 CFU左右）的非目標(biāo)菌株用以挑戰(zhàn)其抑制力。
一般來(lái)說(shuō)，微生物限度檢查與環(huán)境監(jiān)控培養(yǎng)基通常使用TSA與SDA平板，至少需要5株藥典菌株，而無(wú)菌性試驗(yàn)則需要6到7種菌株(方法合適性采用大腸桿菌)。然而，除了藥典規(guī)范的菌株以外，無(wú)菌性檢查用的培養(yǎng)基最好能夠再增加廠內(nèi)分離菌株加以挑戰(zhàn)。最佳的選擇可以是過(guò)去曾經(jīng)造成無(wú)菌性試驗(yàn)失敗的污染菌株，或是曾經(jīng)在該環(huán)境(通常為A、B級(jí)區(qū))所分離的菌株。特別要注意的是，若細(xì)胞制劑/治療產(chǎn)品采用了替代無(wú)菌性試驗(yàn)方法，例如Bact/Alert血培養(yǎng)設(shè)備，在歐洲藥典EP 2.6.27的規(guī)定中，部分菌株與傳統(tǒng)無(wú)菌性試驗(yàn)不同，例如新增了在臨床常見(jiàn)的厭氧感染菌Bacteroides fragilis ATCC 25285；對(duì)于環(huán)境監(jiān)控用培養(yǎng)基，雖然藥典并未強(qiáng)制規(guī)范挑戰(zhàn)菌株為何，但一般來(lái)說(shuō)都是以微生物限量檢查常見(jiàn)的五種菌株來(lái)檢查(金葡、銅綠、枯草、黑曲霉與白念)，然而基于環(huán)境中常態(tài)菌叢通常為非藥典建議QC菌株，例如微球菌(Micrococcus)、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)、棒狀桿菌(Corynebacterium)甚至霉菌及酵母菌等，且基于對(duì)消毒劑效能的考慮，建議至少增加2至3種非藥典所建議的廠房環(huán)境菌株加以挑戰(zhàn)培養(yǎng)基效能。若是廠內(nèi)已經(jīng)建立有不合宜微生物名單(objactionable organism list)，或是發(fā)現(xiàn)了不適當(dāng)?shù)木N(例如霉菌、革蘭氏陰性桿菌等)都可以采用作為環(huán)境監(jiān)控用培養(yǎng)基的效能檢查用菌種。
對(duì)于制藥用水的檢查方式，歐美各國(guó)對(duì)于培養(yǎng)基的選擇各有不同的評(píng)論。但目前比較多藥廠采用的還是R2A與PCA兩種培養(yǎng)基，部分藥廠對(duì)于源水質(zhì)量的檢查還會(huì)增加使用mEndo agar或是顯色培養(yǎng)基(chromogenic agar)來(lái)評(píng)估其革蘭氏陰性桿菌。由于存在于水中的微生物通常處于營(yíng)養(yǎng)缺乏(starvation)或是高壓力(stressed)狀態(tài)，菌種生長(zhǎng)較為緩慢，菌落不明顯，所以培養(yǎng)條件有些許不同，例如某些藥廠采用營(yíng)養(yǎng)較低的R2A培養(yǎng)基低溫培養(yǎng)4-7天，而不是選擇常用的TSA或是PCA培養(yǎng)基培養(yǎng)3天。挑戰(zhàn)用于制藥等級(jí)水檢查用培養(yǎng)基的菌種，考慮的因子會(huì)跟微生物特性有很大的關(guān)系。容易形成生物膜(Biofilm)的假單胞菌(Pseudomonas)、甲基桿菌(Methylobacterium)、羅爾斯頓氏菌(Ralstonia)、寡養(yǎng)單胞菌(Stenotrophomonas)應(yīng)該被列為培養(yǎng)基檢查的菌株，例如日本藥典建議使用甲基桿菌與假單孢菌；革蘭氏陽(yáng)性菌通常不是水中微生物的主角，它們不耐存活于液態(tài)環(huán)境，但是帶有內(nèi)孢子的革蘭氏陽(yáng)性芽孢菌，由于能夠耐熱與UV照射，所以也可以作為培養(yǎng)基挑戰(zhàn)之用，例如歐洲藥典對(duì)于R2A的建議是使用枯草桿菌來(lái)挑戰(zhàn)；不形成生物膜的革蘭氏陰性菌且"非"假單孢菌屬，例如大腸桿菌群，雖然這些細(xì)菌大部份會(huì)在水系統(tǒng)的處理過(guò)程被去除(或是無(wú)法存活)，但這些腸桿菌科成員卻是源水潔凈程度的重要指標(biāo)。然而，藥典并沒(méi)有建議使用何種培養(yǎng)基來(lái)檢查這類微生物。或許常用于環(huán)檢規(guī)范的mEndo agar或是顯色培養(yǎng)基或食品檢驗(yàn)的VRBGA可以列為參考，一來(lái)這些培養(yǎng)基有標(biāo)準(zhǔn)方法可以依循，二來(lái)這些培養(yǎng)基也已經(jīng)有質(zhì)量管理規(guī)范，例如美國(guó)APHA公共衛(wèi)生協(xié)會(huì)。
菌株的選擇 3 (在控制菌用培養(yǎng)基效能方面)
控制菌的檢查需要使用到許多選擇性培養(yǎng)基，例如麥康凱培養(yǎng)基(MacConkey agar/broth)、RV沙門增菌液體培養(yǎng)基(RV broth)、溴化十六烷基三甲銨瓊脂(cetrimide agar)等等。由于這些培養(yǎng)基可能同時(shí)具備有目標(biāo)菌生長(zhǎng)能力、非目標(biāo)菌抑制能力，甚至具備有指示能力，所以其成份組成通常較為復(fù)雜，配制較為繁瑣，在效能檢查上也更為復(fù)雜。以甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基(Mannitol salt agar)為例，需要使用金黃色葡萄球菌來(lái)挑戰(zhàn)其生長(zhǎng)與指示能力，用大腸桿菌挑戰(zhàn)該培養(yǎng)基的抑制能力。
生長(zhǎng)能力的檢查必需在藥典規(guī)定的最低時(shí)間內(nèi)完成培養(yǎng)(<18小時(shí))；抑制能力則須接種>100 CFU的非目標(biāo)菌株且不低于藥典規(guī)范的最長(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)(>72小時(shí))。值得注意的是，2015年版中華人民共和國(guó)藥典對(duì)于指示能力的培養(yǎng)時(shí)間與其他國(guó)際藥典不同，國(guó)際藥典，例如USP是規(guī)定指示能力的培養(yǎng)時(shí)間可以在藥典的規(guī)定時(shí)間以內(nèi)(18-72小時(shí))，但2015年版中華人民共和國(guó)藥典則是更嚴(yán)格要求低于18小時(shí)需觀察得到(黃色菌落與黃色圈環(huán))。對(duì)于液態(tài)增菌培養(yǎng)夜，例如TSB、MacConkey broth、RV broth對(duì)指示能力則沒(méi)有明確要求。除了目前2015年版中華人民共和國(guó)藥典所規(guī)范的七類控制菌檢查以外，對(duì)于伯克氏菌(Burkholderia)以及其他不合宜微生物(objectionable)檢查用的培養(yǎng)基，也應(yīng)建立一套培養(yǎng)基效能檢查以及方法合適性檢查的方法。
