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MPN法作為實驗室微生物定量檢測常用有效的方法之一，但是很多檢測人員對MPN法的理解太膚淺、不充分，導致在使用MPN法的時候存在很多錯誤的認識，有時還容易導致檢測結果錯誤。針對這些問題，今天我們就一起來聊聊“MPN法的原理、應用過程中注意事項”！
還記得剛畢業后，我就來到一個做大豆制品的公司，入職成了一名光榮的微生物化驗員，在工作的第一天，化驗室的師父就給我簡單介紹了每天的大致工作任務。
在工作的第二天，我就很納悶“菌落是怎么形成的、什么是MPN？”，于是我就鼓足勇氣說：“師父，我有個問題想問你，什么是MPN”
師父回答：“最大可能數”，眼皮都沒有抬一下。
我想了想，又膽怯的問：“那啥是最大可能數？”
師父提高了嗓門，回答：“是一種用統計學算出來的樣品中最可能的數！”
我又想了想，又問：“這個數有什么意義？它是怎么算的？”
師父猛地抬起頭，眉頭緊鎖地回了一句：“今天的培養皿都洗了么？三角瓶呢？培養基滅了沒？夠用嗎？......”
我聽聞，溜溜的去干活去了，但是還是沒弄明白。后來就聽見師父自言自語說，誰能告訴我啊，什么是MPN，我也有點蒙......”
要想說清楚MPN，首先要了解MPN法的概念。
MPN（most probable number）法：即最近似數法，也稱為最大可能數法，是食品檢驗中常用的方法。1915年，McCrady首次發表了用MPN法 (最大可能數法) 來估算細菌濃度的方法， 這是一種應用概率理論來估算細菌濃度的方法。
•MPN法是統計學和微生物學結合的一種定量檢測法。待測樣品經系列稀釋并培養后,根據其未生長的最低稀釋度與生長的最高稀釋度,應用統計學概率論推算出待測樣品中大腸菌群的最大可能數。
•MPN值并不能表示實際菌落數， 實際菌落數有可能落在置信區間內的任何一點，MPN值是落在這個置信區間內概率最大的一點。
MPN法：適用于具有特殊生理功能的微生物類群或者未經處理的含少量菌的食品。
•MPN法適用性廣，與很多種類的食品的微生物限量要求方法一致，是常用有效的方法；
•靈敏度較高，適用于污染菌落較少的樣品；
•測定MPN值時，要考慮陽性管數；
相同的MPN值，代表的實際菌落數范圍卻有很大的差別。假如你的產品標準為10MPN/ g，實測值為9.4MPN/g（陽性管數“0-3-0”），那么很難判定你的產品是否合格。
•MPN值非連續；
•MPN值的準確度隨Pmax的減小而減小。
現在，明白了么？MPN值就是在現有因素下能推算出的微生物含量概率最大的那個濃度。接下來我們以大腸菌群檢測為例一下其應用的注意事項和要點！
1.MPN法注意事項：
•全過程不得超過15min。原因是大腸菌群在適宜條件下繁殖很快，15min就可以繁殖一代。
•樣品勻液的pH值應在6.5～7.5之間。
•接種量是MPN法成功與否的關鍵，一方面接種量要適當以便于出現全陽性和全陰性的稀釋度，另一方面接種量必須準確。MPN表和MPN計算公式都是和接種量密切相關的。而培養基的體積是多少并不重要，只要接種后培養基濃度接近正常濃度(單倍濃度)就可以了。通常接種稀釋液的體積是1 mL,這個體積必須準確，而培養基的量是10mL還是9mL影響不大。
•以48h±2h為最終觀察結果時限。大腸菌群結果也以此時為最終結果，但是原始記錄要體現24小時的培養結果記錄。
•MPN值是基于統計的估計結果， MPN值是可能性最大的一個估計值，其95%置信區間有95%的可能包括真實結果。結果報告的MPN值要結合95%置信限來理解， MPN結果實際上是一個結果分布。
給一個例子來理解MPN結果吧！
【例】 GB 4789.3-2016 中表B. 1接種量0. 1 g、0.01 g和0.001 g對應的陽性管數2、 2、0。產品限量是“<20 MPN/g"。此產品合不合格?
查表得MPN值為“21MPN/g",其上、下95%置信限分別
為“4.5MPN/g"和“42MPN/g"。即每克樣品中21個大腸菌群，有95%的可能結果分布在每克4.5(下限)個至42個(上限)之間。換句話說，接種量0.1g、0.01 g和 0.001 g對應的陽性管數2、2、0的100次檢測中，有95個結果在每克4.5個至42個之間，其中每克21個的結果次數最多。
2.MPN檢索表的應用
•MPN（最可能數most probable number）是表示樣品中活菌密度的估測。因此MPN值只是活菌密度的估算值，并不是樣品中活菌數的真值。
3.使用MPN檢索表的注意點
•這個MPN檢索表是ISO、FDA、AOAC、USDA/FSIS、北歐等標準通用的。
•表里的數字是有小數點的。
•當實驗結果在MPN表中無法查找到MPN值時，如：陽性管數為122，123，232，233等時，建議增加稀釋度（可做4~5個稀釋度），使樣品最高稀釋度能達到陰性終點(如果污染程度不能判定，則多加一稀釋度），然后再遵循相關的規則進行查找，最終確定MPN值。
