固定于濾膜上的RNA的預(yù)雜交、雜膠及淋洗等條件，與DNA雜交的相應(yīng)條件基本相同。現(xiàn)簡述如下1）用下列兩種溶液之一進(jìn)行預(yù)雜交，時間1－2小時。若于42℃進(jìn)行，應(yīng)采用。
50％甲酰胺
5xSSPE
2xDenhardt試劑
0.1％SDS
若于68℃進(jìn)行，應(yīng)采用：
6xSSC
2xDenhardt試劑
0.1％SDS
2）在預(yù)雜交液中加入變性的放射性標(biāo)記探針，如欲檢測低豐度mRNA， 所用探針的量至少為0.1μg，其放射性比活度應(yīng)大于2x108計(jì)數(shù)/（分．μg）在適宜的溫度條件下繼續(xù)溫育16-24小時。切記RNA只與雙鏈DNA中一條單鏈互補(bǔ)，因此如用單鏈探針， 則必須是能與RNA互補(bǔ)的一條單鏈。
3）用1xSSC、0.1％SDS于室溫洗漠20分鐘， 隨后用0.2xSSX、 0.1％SDS于68℃洗膜3次每次20分鐘。
4）用X光片（Kodak XAR－2或與之相當(dāng)?shù)漠a(chǎn)品）進(jìn)行放射自顯影， 附加增感屏于－17℃曝光24-48小時。