我國(guó)現(xiàn)有結(jié)核病人約450萬(wàn)例,每年病死近13萬(wàn)人[1]。造成上述嚴(yán)峻形勢(shì)的重要原因之一是結(jié)核病的早期快速診斷技術(shù)不理想。目前已有的結(jié)核抗體檢測(cè)試劑均為未純化的結(jié)核菌菌液抗原,存在特異性差異的問(wèn)題[2,3]。我們對(duì)南京大淵生物技術(shù)工程公司使用的基因工程表達(dá)的結(jié)核菌蛋白和脂多糖生產(chǎn)的結(jié)核芯片系統(tǒng)進(jìn)行了檢測(cè)實(shí)驗(yàn),取得較理想的快速診斷效果。

1 材料與方法

111 結(jié)核病患者血清標(biāo)本 由武漢鋼鐵公司第二職 工醫(yī)院、海口市結(jié)核病防治所、海南省農(nóng)墾總局醫(yī)院 提供,共226份。其中活動(dòng)性肺結(jié)核（痰涂片或者細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)核菌陽(yáng)性）病人血清113份,慢性肺結(jié)核病人血清90份,結(jié)核性胸膜炎、結(jié)核性腦膜炎、腎結(jié)核病人血清23份。正常對(duì)照血清由海南省農(nóng)墾總局醫(yī)院住院非結(jié)核病人血清48份,門診體檢病人血清53份,共101份。

112 蛋白芯片 結(jié)核菌多抗原的IgG抗體芯片檢測(cè) 系統(tǒng)（簡(jiǎn)稱:結(jié)核芯片系統(tǒng)）:南京大淵生物技術(shù)工程有限公司提供。

113 結(jié)核抗體檢測(cè)ELISA試劑由四川省綿陽(yáng)市404 醫(yī)院科技開(kāi)發(fā)部提供。

114 PBT-X2蛋白芯片閱讀儀由南京大淵生物技術(shù) 工程有限公司提供。

115 芯片系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)方法 先在芯片上標(biāo)記上樣品編 號(hào),再在芯片盒窗口內(nèi)滴加4滴試劑A,使膜表面完全浸濕。待完全滲入后,室溫放置1min,加待檢血清 100μl。待血清完全滲入后,再滴加6滴試劑B。待試劑B完全滲入后,滴加10滴試劑C。待試劑C完全滲入后,最后滴加6滴試劑D。反應(yīng)完畢后30min內(nèi),將芯片放入芯片閱讀系統(tǒng)進(jìn)行分析。陰性和陽(yáng)性結(jié)果根據(jù)儀器生產(chǎn)廠家設(shè)置參數(shù)自動(dòng)判別。

2 結(jié)果

211 結(jié)核芯片系統(tǒng)檢測(cè)各種類型結(jié)核病人的陽(yáng)性率  結(jié)核芯片系統(tǒng)檢測(cè)活動(dòng)型肺結(jié)核、慢性肺結(jié)核和其 它結(jié)核病人的敏感性分別為79165%（90/113）、

212 結(jié)核芯片系統(tǒng)各種指標(biāo)檢測(cè)的意義 見(jiàn)表2。 抗結(jié)核菌單個(gè)抗原的抗體陽(yáng)性率以抗38kDa的陽(yáng)性率最高,為15149%,次之為抗LAM抗體陽(yáng)性率 （10162%）,最低為抗16kDa抗體的陽(yáng)性率（8141%）。三個(gè)單指標(biāo)陽(yáng)性率之和為33152%。 抗結(jié)核菌三種抗原的抗體均陽(yáng)性的比例最高,占21168%。其他各種抗原或者抗原組合的抗體陽(yáng)性率 的構(gòu)成比見(jiàn)表2。

表2 各種結(jié)核菌抗原的抗體陽(yáng)性率構(gòu)成比 Table2 ThepositiveratesofTBantibodiesto3kindsofMtuberculosis antibodiesdetectedbyTBproteinchipmethod LAM16kDa38kDa陽(yáng)性結(jié)核病例數(shù)所占比例（%） +++4921168--+3515149+--2410162-+-198141-++187196++-125131+-+10144---6830109合計(jì) 226 100100 213 結(jié)核蛋白芯片的主要性能指標(biāo) 敏感性為69191%（158/226）,特異性為84116%（85/101）。陽(yáng)性 預(yù)測(cè)值為9018%（158/174）,陰性預(yù)測(cè)值55156%（85/ 153）。診斷效率為154176%。見(jiàn)表3。

表3 結(jié)核蛋白芯片法檢測(cè)結(jié)核病人和對(duì)照組的結(jié)果Table3 ResultsofdetectionofTBpatientsandthecontrols標(biāo)本分類陽(yáng)性陰性合計(jì)病人15868226對(duì)照1685101合計(jì) 174 153 327 214 結(jié)核芯片檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)結(jié)果與ELISA法檢測(cè)結(jié) 果的比較 ELISA法檢測(cè)結(jié)核病人標(biāo)本的陽(yáng)性率為66181%（151/226）。

結(jié)核蛋白芯片法檢測(cè)結(jié)核病人抗體的總陽(yáng)性率為69191%（158/226,見(jiàn)表1）。兩者之 間差異無(wú)顯著性（χ2=110,P>0105）。ELISA法檢測(cè)對(duì)照組的結(jié)核抗體陽(yáng)性率為13186%（14/101）,特異性 為86114%。ELISA檢測(cè)的特異性與結(jié)核芯片檢測(cè)系 統(tǒng)的特異性84185%（85/101）相當(dāng),二者之間差異無(wú)顯 著性（ χ2=110,P>0105）。

215 結(jié)核芯片系統(tǒng)檢測(cè)與ELISA技術(shù)檢測(cè)的總符合 率 兩種方法檢測(cè)結(jié)核病人標(biāo)本均陽(yáng)性130例,均陰性47例,合計(jì)為177例,二者檢測(cè)結(jié)核病人的符合率為78132%（177/226）。

兩種方法同時(shí)檢測(cè)對(duì)照組標(biāo)本101份,二法均陽(yáng)性7例,均陰性81例,合計(jì)為94例。 符合率為93107%。兩法檢測(cè)結(jié)核病人和對(duì)照組共327份標(biāo)本,均陽(yáng)性134例,均陰性131例,相符總數(shù)為265例。總符合率為81104%（265/327）。3 討論 檢測(cè)結(jié)核菌抗體用于結(jié)核病的診斷一直是結(jié)核病防治研究追求的目標(biāo)。抗結(jié)核分枝桿菌多種抗原的IgG抗體檢測(cè)蛋白芯片系統(tǒng)點(diǎn)樣了3種結(jié)核菌或者結(jié)核菌復(fù)合群特異性抗原,即脂阿拉伯甘露糖（LAM）[4,5]、16kDa[6]和38kDa[6,7]蛋白等三種抗原。這三種抗原的抗體檢測(cè)對(duì)于結(jié)核菌感染的血清學(xué)輔助診斷具有很高的敏感性、特異性[6]。

因此,檢測(cè)可疑患者血清中檢測(cè)此特異性抗體,而對(duì)結(jié)核病患者的早期診斷、機(jī)體免疫功能的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)以及結(jié)核病感染的大規(guī)模血清流行病學(xué)調(diào)查具有很高的應(yīng)用價(jià)值。 結(jié)核芯片系統(tǒng)檢測(cè)抗多種結(jié)核菌抗原的抗體的敏感性為69191%,特異性為84185%,診斷指數(shù)為154176%。陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值分別為9018%及55156%。結(jié)核芯片系統(tǒng)和ELISA檢測(cè)的總符合率達(dá)81104%。表明該試劑符合臨床診斷結(jié)核病的要求,可 用結(jié)核病的血清學(xué)輔助診斷。