“賽默飛之生物通2012實(shí)驗(yàn)室創(chuàng)新技術(shù)大獎(jiǎng)”評(píng)選活動(dòng)開(kāi)展以來(lái)，生物通已經(jīng)陸陸續(xù)續(xù)收到不少項(xiàng)目，這些項(xiàng)目中有的能減少實(shí)驗(yàn)步驟，有的能降低實(shí)驗(yàn)成本，還有一些改進(jìn)了實(shí)驗(yàn)設(shè)備，讓我們的實(shí)驗(yàn)過(guò)程更加輕松。

 

參選項(xiàng)目：一種簡(jiǎn)單快速的miRNA檢測(cè)新方法----液相雜交顯色法

 

背景：MicroRNAs(miRNAs)是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的在進(jìn)化上高度保守的一類(lèi)非編碼小RNA(~22nt)。它作為轉(zhuǎn)錄后關(guān)鍵的基因表達(dá)調(diào)控子可參與幾乎所有的生理和病理過(guò)程，革新了我們對(duì)基因表達(dá)調(diào)控的傳統(tǒng)認(rèn)識(shí)。miRNAs的檢測(cè)是其功能研究的基礎(chǔ)，但小片段的特性使其檢測(cè)十分困難。

 

PCR和Northernblot是目前檢測(cè)單個(gè)miRNA最廣泛使用的兩種方法。PCR方法敏感性高，但假陽(yáng)性的憂慮和引物設(shè)計(jì)的困難限制了它的使用。Northernblot是非常有效的檢測(cè)工具，但傳統(tǒng)的固相雜交技術(shù)程序復(fù)雜、時(shí)間漫長(zhǎng)且操作不便。新出現(xiàn)的液相雜交技術(shù)檢測(cè)速度快，但需要特定的熒光信號(hào)檢測(cè)儀器。

 

方法改進(jìn)：我們這里報(bào)道一種新的miRNA檢測(cè)方法：液相雜交顯色法(LHCD)。

 

這種方法是將提取純化的小RNA與5’端生物素標(biāo)記的DNA探針進(jìn)行液相雜交，接著用核酸外切酶消化多余的探針，再將雜交液點(diǎn)于尼龍膜上，之后ABC孵育，最后BCIP/NBP、DAB或者ECL顯色。

 

LHCD能夠區(qū)別miRNA家族成員間一個(gè)堿基的差異，其靈敏度可以達(dá)到2.5fmol，全過(guò)程耗時(shí)不到3個(gè)小時(shí)。本方法由于整合了快速液相雜交和親和素-生物素信號(hào)放大系統(tǒng)(ABC)兩大技術(shù)，不但實(shí)現(xiàn)了miRNA的簡(jiǎn)單、快速、高靈敏度檢測(cè)，其可視化的信號(hào)目測(cè)，還省去了昂貴的信號(hào)檢測(cè)儀。此外，本方法簡(jiǎn)單的操作流程，使其容易學(xué)習(xí)和方便使用。