——鹽酸副玫瑰苯胺比色法

一、目的與要求：

1、掌握鹽酸副玫瑰苯胺比色法測定S0₂的方法與原理。

2、熟悉72I型分光光度計的工作原理和使用方法。

二、原理：

    二氧化硫被四氯汞鈉吸收液吸收后，生成穩(wěn)定的絡(luò)合物，再與甲醛和鹽酸副玫瑰苯胺作用，并經(jīng)分子重排后，生成紫紅色的絡(luò)合物。顏色的深淺與二氧化硫的濃度成正比，可以比色測定。反應(yīng)式如下：

三、試劑及儀器

（1）四氯汞鈉吸收液：稱取氯化汞（HgCl₂）27.2，氯化鈉11.7克，溶于水中并稀釋至1000毫升，放置過夜，過濾后使用。

（2）顯色計：融解鹽酸福玫瑰苯胺100毫克于200毫升水中，加40毫升濃鹽酸，定容至500毫升，置于棕色瓶中。

（3）2％甲醛溶液：吸取37-40％甲醛5毫升于水中，并稀釋至100毫升。

（4）1％淀粉指示劑。

 (5) 冰醋酸。

     (6) 蛋白質(zhì)沉淀劑。

     a)飽和硼砂溶液：溶解約25克硼砂于500毫升水中．

     b)硫酸鋅溶液溶解150克硫酸鋅于500毫升水中。

    (7) 0.1N碘溶液。

    (8) 0.1N硫氏硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液。

并稀釋至

    (9) 二氧化硫標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取0.5克亞硫酸氫鈉溶于200毫升四氯汞鈉吸收液中，放置過夜。上清液用定量濾紙過濾備用，按下法進(jìn)行標(biāo)定。

取10毫升亞硫酸氫鈉四氯汞鈉溶液于250毫升碘價瓶中，加水100毫升，加入0.1N碘溶液20毫升，冰醋酸5毫升，搖勻，用0.1N硫代硫酸鈉溶液滴定到淡黃色，加入1％淀粉指示劑5-6滴，繼續(xù)滴定至無色。空白試驗于250毫升碘價瓶中加A300毫升水，按上述步驟同樣操作。

SO₂(毫克/毫升)＝(V₁-V₂)/10×N×32.03

V₁；空白消耗硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的量(m1)

V₂：標(biāo)準(zhǔn)消耗硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的量(m1)

N：硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的當(dāng)量濃度

32.03：0.1N硫代硫酸鈉溶液1毫升相當(dāng)于二氧化硫的量(毫克)

根據(jù)計算結(jié)果，用吸收液稀釋成1毫升相當(dāng)于2微克的二氧化硫。此應(yīng)用液于4℃冰箱中保存，可供一周內(nèi)使用。

    (10)分光光度計

    (1) 樣品處理：稱取經(jīng)搗碎蘑菇樣品20克，加入飽和硼砂溶液5毫升，硫酸鋅2毫升，攪拌均勻，移入100毫升容量瓶中，加水至刻度。過濾，濾液供測定用(濾液必須澄清，否則要重復(fù)過濾數(shù)次)。

    (2) 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：吸取每毫升相當(dāng)于2微克的二氧化硫標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0毫升于25毫升比色管中，各加入2％甲醛溶液1毫升，顯色劑1毫升，另分別依次加入10、9、8、7、6、5毫升吸收液，混勻，靜置15分鐘，于分光光度計580毫微米波長下測定

    (3) 樣品分析：吸取濾液5毫升，加人吸收劑5毫升，2％甲醛溶液1毫升，顯色劑1毫升，混勻，靜置15分鐘，于分光光度計580毫微米波長下測定光密度。根據(jù)測得的光密度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得相應(yīng)的二氧化硫的含量。

    計算：               

           S02：(毫克／公斤)＝C/W×1000

C；相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)的量(毫克)。

    W：測定時所取樣品溶液相當(dāng)于樣品的量(克)。

    注意事項：

    (1)最適反應(yīng)為20-25℃，溫度低靈敏度低，故標(biāo)準(zhǔn)管與樣品管需在相同溫度下顯色。

    (2)溫度為15-16℃，放置時間需延長為25分鐘，顏色穩(wěn)定20分鐘。

    (3)鹽酸副玫瑰苯胺中的鹽酸用量對顯色有影響，加人鹽酸量多，顯色淺，加入量少，顯色深，所以要按操作進(jìn)行。

    (4) 甲醛濃度在0.15-0.25％時，顏色穩(wěn)定，故選擇0.2％甲醛溶液。

    (5) 顏色較深的樣品，可用l0％活性炭脫色。

    (6) 測定粉絲，粉條中的二氧化硫時，樣品要浸泡30分鐘。

    (7) 樣品加入四氯汞鈉吸收液于100毫升容量瓶中，加水至刻度，搖勻。此溶液中的二氧化硫含量在24小時之內(nèi)很穩(wěn)定。

實驗法二、滴定法二氧化硫的測定

一、原理

樣品中的二氧化硫包括游離的和結(jié)合的，加人氫氧化鉀使之破壞其結(jié)合狀態(tài)，并使之固定。

    S0₂+2KOH  -  K₂S0₃+H₂0

    加入硫酸又使二氧化硫游離，可用標(biāo)準(zhǔn)碘液滴定之，

    K₂S0₃+H₂S0₄  -  K₂S0₄+H₂O+S0₂

    S0₂+2H₂0+1₂ - H₂S0₄+2HI

反應(yīng)式如下：

    到達(dá)終點時，稍過量的碘即與淀粉指示劑作用，生成蘭色的碘-淀粉復(fù)合物。從碘標(biāo)準(zhǔn)溶液的消耗量可計算出二氧化硫的含量。

  二、試劑及儀器：

    (1)1N氫氧化鉀溶液：溶解57號氫氧化鈉于蒸餾水中，加蒸餾水稀釋至1000毫升。

    (2)1：3硫酸溶液。

    (3)0.01N碘標(biāo)準(zhǔn)溶液。

    (4)O.1％淀粉溶液。

    (5)250毫克容量瓶。

(6)250毫升碘價瓶或具塞錐形瓶。

三、操作方法：

在小燒杯內(nèi)稱取試樣20克(準(zhǔn)確至0.01克)，用蒸餾水將試樣洗入250毫升容量瓶中，加蒸餾水至總  容量的二分之一，加塞振蕩，再加蒸餾水至刻度，搖勻。待瓶內(nèi)液體澄清后，用50ml移液管吸取澄清液50毫升注入250毫升碘價瓶中，加入1NKOH溶液25毫升。將瓶內(nèi)混和液用力振搖后放置l0分鐘，然后一邊振蕩一邊加入1：3硫酸溶液10毫升和淀粉液1毫升，以碘標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至呈現(xiàn)蘭色并半分鐘不褪色為止。同時不加試樣按上述進(jìn)行空白試驗。

計算： 

   S02＝((V1-V2)×N×0.032×5)/W×100

V₁：滴定時所耗碘標(biāo)液的量(毫升)。

V₂：滴定空白試驗所耗碘標(biāo)液的量(毫升)。

N：碘標(biāo)準(zhǔn)溶液的規(guī)定濃度。

W：樣品的重量(克)

0.032：二氧化硫的毫克當(dāng)量。