手機(jī)版
小伙伴們用液相做實(shí)驗(yàn)的時(shí)候是不是總會(huì)遇到各種壓力問(wèn)題和基線問(wèn)題，比如高了，低了，堵了，漏了，飄了等等。今天一起來(lái)看看導(dǎo)致這些問(wèn)題的原因吧，從根源上突破~
液相色譜壓力異常
液相系統(tǒng)壓力產(chǎn)生的原因在于流動(dòng)相流經(jīng)管路及色譜柱時(shí)會(huì)有阻力，即所謂的反壓或系統(tǒng)壓力。漏液會(huì)引起系統(tǒng)壓力的降低，而堵塞會(huì)引起系統(tǒng)壓力的飆升。系統(tǒng)壓力的單位有：巴（Bar）、兆帕（Mpa）和磅／平方英吋（psi），它們之間的換算關(guān)系為1Bar＝0.1Mpa＝14.5psi。
1、影響因素
影響系統(tǒng)壓力的因素主要有流動(dòng)相的溶劑組成、溫度及流速這三方面：
1）流動(dòng)相的粘度是產(chǎn)生反壓的主要原因，下圖為有機(jī)溶劑-水的粘度隨組成與壓力的關(guān)系圖：
由上圖可以看到，乙腈-水比例為（20:80）、甲醇-水比例為（40:60至50:50）時(shí)，系統(tǒng)的壓力最大。因此，在做實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)盡量避開(kāi)這個(gè)比例范圍。另外，異丙醇粘度大，一般不作流動(dòng)相使用。
2）流速對(duì)反壓的影響是線性關(guān)系，流速增加，反壓亦增大。
3）溫度對(duì)反壓的影響是反比關(guān)系，溫度升高，反壓降低，對(duì)某些流動(dòng)相的影響更大一些。
4）液相色譜儀各模塊之間的連接管路也會(huì)產(chǎn)生壓力，系統(tǒng)壓力與管路的長(zhǎng)度成正比，與管路直徑的四次方成反比（1/4D）。上述考慮的是柱外因素對(duì)系統(tǒng)壓力的影響，色譜柱對(duì)系統(tǒng)壓力的影響也很大，反壓與色譜柱長(zhǎng)度成正比，與填料顆粒度的平方成反比（2.5μｍ填料比3.5μｍ填料反壓高）。
2、壓力原因
具體到壓力問(wèn)題的表現(xiàn)形式上，主要有壓力高、壓力低或沒(méi)有壓力以及壓力不穩(wěn)：
①造成壓力高問(wèn)題的主要原因有：
1）溫度太低；
2）流速太高；
3）流動(dòng)相粘度大；
4）管路堵塞；
5）儀器或色譜柱堵塞；
6）壓力傳感器問(wèn)題。
②產(chǎn)生壓力低情況的可能原因：
1）系統(tǒng)內(nèi)有滲漏處；
2）單向閥堵塞；
3）入口管路有氣泡；
4）溶劑濾頭堵塞；
5）所用溶劑不正確，儲(chǔ)液瓶中無(wú)溶劑；
6）溫度太高，流速太低；
7）泵未輸送流動(dòng)相；
8）泵關(guān)閉或保險(xiǎn)絲斷了。圖片
以上為儀器單向閥的結(jié)構(gòu)示意圖，如果某些原因造成寶石球與球基座發(fā)生黏結(jié)，造成液體不能進(jìn)入到泵中，從而造成泵的壓力偏低。
3、造成壓力波動(dòng)可能的原因有：
1）脫氣機(jī)排氣不充分；
2）流動(dòng)相未正確脫氣；
3）所用溶劑不混溶或易揮發(fā)；
4）壓力傳感器及泵問(wèn)題。
基線噪音為題
1、基線噪音大
1）流動(dòng)相中有氣體：溶劑脫氣；
2）流動(dòng)池中有氣泡：在出口處使用0.009”的管路；
3）色譜柱上的污染物被洗脫：平衡系統(tǒng)，直至基線穩(wěn)定；如樣品中有保留非常強(qiáng)的組分，可設(shè)置強(qiáng)洗脫程序；
4）滲漏：此時(shí)應(yīng)修復(fù)滲漏，重新連接或更換接頭；
5）檢測(cè)器燈能量低：更換燈；
6）靈敏度太高：使用合適的采樣頻率，調(diào)節(jié)增益（如ELSD檢測(cè)器）；
7）檢測(cè)器流動(dòng)池臟：清潔流動(dòng)池；
8）電噪音：除去電噪音的來(lái)源：屏蔽電纜，清潔觸點(diǎn)；
9）采樣頻率設(shè)置過(guò)大：一味追求高采樣頻率，可能對(duì)靈敏度沒(méi)有任何幫助，同時(shí)也會(huì)產(chǎn)生比較大的噪音：UV檢測(cè)器推薦降低采樣頻率，HPLC推薦1-5Hz，UPLC推薦20Hz。
2、同步的基線噪音
1）大多數(shù)情況下都是泵引起的，泵頭中存在空氣：將溶劑脫氣，并重新灌注泵；
2）單向閥問(wèn)題：超聲清洗單向閥或更換；
3）柱塞桿斷裂：更換；
4）混合問(wèn)題：更換一個(gè)體積更大的Mixer，以增加系統(tǒng)體積；
5）電噪音：改變電路，除去來(lái)源。
3、不同步的基線噪音
1）氣泡：流動(dòng)相要脫氣；
2）檢測(cè)器中有氣泡/空氣：流動(dòng)相脫氣，或在檢測(cè)器的后面加反壓（不適用于RI檢測(cè)器）；
3）滲漏：特別是肉眼無(wú)法發(fā)現(xiàn)的微漏或者泵的內(nèi)漏，會(huì)造成流速的變化和混合比例的變化，從而導(dǎo)致基線噪音，此時(shí)應(yīng)修復(fù)滲漏，重新連接或更換接頭；
4）管路堵塞：除去堵塞，沖洗系統(tǒng)；
5）電噪音：除去來(lái)源，改變電路。
4、基線漂移：上漂或者下漂
1）梯度變化引起，如溶劑Ｂ的吸收值高于溶劑A：使用基線差減，或嘗試新的流動(dòng)相；
2）化合物從色譜柱上洗脫：平衡系統(tǒng)，直至基線穩(wěn)定；如樣品中有保留非常強(qiáng)的組分，可設(shè)置強(qiáng)洗脫程序；
3）溶劑改變（氣體吸附，蒸發(fā)）：氦氣脫氣，隔離溶劑；
4）溶劑滲漏：擰緊或者更換接頭；
5）檢測(cè)器溫度影響（尤其是示差，電化學(xué)以及電導(dǎo)檢測(cè)器）：流動(dòng)池溫度調(diào)節(jié)；
6）柱溫波動(dòng)：等待柱溫平穩(wěn)，使用柱預(yù)加熱器；
7）壓力變化：過(guò)濾溶劑以及樣品，或樣品太粘稠；
8）混合問(wèn)題：更換一個(gè)體積更大的Mixer，以增加系統(tǒng)體積。
5、Cyclic基線
1）溫度影響：隔離熱源，或搬離臨近的通風(fēng)口，或增加流動(dòng)池溫度；
2）混合問(wèn)題：更換一個(gè)體積更大的Mixer，以增加系統(tǒng)體積；
3）流動(dòng)相中的氣體：溶劑脫氣；
4）泵不穩(wěn)定：檢查維修泵；
5）管路堵塞：沖洗系統(tǒng)，排除并除去堵塞源頭；
6）電問(wèn)題：改變電路，或除去根源。
6、基線上的毛刺
1）氣泡：溶劑脫氣，并重新灌注泵，流動(dòng)相脫氣越好，基線就會(huì)越好；
2）信號(hào)連接不好，連線變松：清潔并擰緊檢測(cè)器上的導(dǎo)線，或檢查連線是否有損壞，或更換鏟形接線片；
3）燈繼電器試圖點(diǎn)燃熄滅的燈：更換燈；
4）電噪音：更換電路，或除去根源。
7、小結(jié)
1）確保無(wú)電源及電噪音干擾；
2）為避免基線噪音，確保儀器系統(tǒng)內(nèi)無(wú)氣泡或空氣，流動(dòng)相首選過(guò)濾脫氣；排盡管路、進(jìn)樣器、檢測(cè)池中的氣泡；選擇合適的接頭和管路，防止?jié)B漏；
3）在編輯方法時(shí)，針對(duì)HPLC和UPLC儀器UV檢測(cè)器設(shè)置合適的采樣頻率，HPLC推薦1-5Hz，UPLC推薦20Hz；
4）保持良好的操作習(xí)慣，如UPLC儀器水相流動(dòng)相每天更換，添加了緩沖鹽的流動(dòng)相過(guò)0.2μｍ溶劑過(guò)濾膜等，都會(huì)減小基線噪音的產(chǎn)生。
文章來(lái)源：網(wǎng)絡(luò)
液相色譜壓力異常
液相系統(tǒng)壓力產(chǎn)生的原因在于流動(dòng)相流經(jīng)管路及色譜柱時(shí)會(huì)有阻力，即所謂的反壓或系統(tǒng)壓力。漏液會(huì)引起系統(tǒng)壓力的降低，而堵塞會(huì)引起系統(tǒng)壓力的飆升。系統(tǒng)壓力的單位有：巴（Bar）、兆帕（Mpa）和磅／平方英吋（psi），它們之間的換算關(guān)系為1Bar＝0.1Mpa＝14.5psi。
1、影響因素
影響系統(tǒng)壓力的因素主要有流動(dòng)相的溶劑組成、溫度及流速這三方面：
1）流動(dòng)相的粘度是產(chǎn)生反壓的主要原因，下圖為有機(jī)溶劑-水的粘度隨組成與壓力的關(guān)系圖：
由上圖可以看到，乙腈-水比例為（20:80）、甲醇-水比例為（40:60至50:50）時(shí)，系統(tǒng)的壓力最大。因此，在做實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)盡量避開(kāi)這個(gè)比例范圍。另外，異丙醇粘度大，一般不作流動(dòng)相使用。
2）流速對(duì)反壓的影響是線性關(guān)系，流速增加，反壓亦增大。
3）溫度對(duì)反壓的影響是反比關(guān)系，溫度升高，反壓降低，對(duì)某些流動(dòng)相的影響更大一些。
4）液相色譜儀各模塊之間的連接管路也會(huì)產(chǎn)生壓力，系統(tǒng)壓力與管路的長(zhǎng)度成正比，與管路直徑的四次方成反比（1/4D）。上述考慮的是柱外因素對(duì)系統(tǒng)壓力的影響，色譜柱對(duì)系統(tǒng)壓力的影響也很大，反壓與色譜柱長(zhǎng)度成正比，與填料顆粒度的平方成反比（2.5μｍ填料比3.5μｍ填料反壓高）。
2、壓力原因
具體到壓力問(wèn)題的表現(xiàn)形式上，主要有壓力高、壓力低或沒(méi)有壓力以及壓力不穩(wěn)：
①造成壓力高問(wèn)題的主要原因有：
1）溫度太低；
2）流速太高；
3）流動(dòng)相粘度大；
4）管路堵塞；
5）儀器或色譜柱堵塞；
6）壓力傳感器問(wèn)題。
②產(chǎn)生壓力低情況的可能原因：
1）系統(tǒng)內(nèi)有滲漏處；
2）單向閥堵塞；
3）入口管路有氣泡；
4）溶劑濾頭堵塞；
5）所用溶劑不正確，儲(chǔ)液瓶中無(wú)溶劑；
6）溫度太高，流速太低；
7）泵未輸送流動(dòng)相；
8）泵關(guān)閉或保險(xiǎn)絲斷了。圖片
以上為儀器單向閥的結(jié)構(gòu)示意圖，如果某些原因造成寶石球與球基座發(fā)生黏結(jié)，造成液體不能進(jìn)入到泵中，從而造成泵的壓力偏低。
3、造成壓力波動(dòng)可能的原因有：
1）脫氣機(jī)排氣不充分；
2）流動(dòng)相未正確脫氣；
3）所用溶劑不混溶或易揮發(fā)；
4）壓力傳感器及泵問(wèn)題。
基線噪音為題
1、基線噪音大
1）流動(dòng)相中有氣體：溶劑脫氣；
2）流動(dòng)池中有氣泡：在出口處使用0.009”的管路；
3）色譜柱上的污染物被洗脫：平衡系統(tǒng)，直至基線穩(wěn)定；如樣品中有保留非常強(qiáng)的組分，可設(shè)置強(qiáng)洗脫程序；
4）滲漏：此時(shí)應(yīng)修復(fù)滲漏，重新連接或更換接頭；
5）檢測(cè)器燈能量低：更換燈；
6）靈敏度太高：使用合適的采樣頻率，調(diào)節(jié)增益（如ELSD檢測(cè)器）；
7）檢測(cè)器流動(dòng)池臟：清潔流動(dòng)池；
8）電噪音：除去電噪音的來(lái)源：屏蔽電纜，清潔觸點(diǎn)；
9）采樣頻率設(shè)置過(guò)大：一味追求高采樣頻率，可能對(duì)靈敏度沒(méi)有任何幫助，同時(shí)也會(huì)產(chǎn)生比較大的噪音：UV檢測(cè)器推薦降低采樣頻率，HPLC推薦1-5Hz，UPLC推薦20Hz。
2、同步的基線噪音
1）大多數(shù)情況下都是泵引起的，泵頭中存在空氣：將溶劑脫氣，并重新灌注泵；
2）單向閥問(wèn)題：超聲清洗單向閥或更換；
3）柱塞桿斷裂：更換；
4）混合問(wèn)題：更換一個(gè)體積更大的Mixer，以增加系統(tǒng)體積；
5）電噪音：改變電路，除去來(lái)源。
3、不同步的基線噪音
1）氣泡：流動(dòng)相要脫氣；
2）檢測(cè)器中有氣泡/空氣：流動(dòng)相脫氣，或在檢測(cè)器的后面加反壓（不適用于RI檢測(cè)器）；
3）滲漏：特別是肉眼無(wú)法發(fā)現(xiàn)的微漏或者泵的內(nèi)漏，會(huì)造成流速的變化和混合比例的變化，從而導(dǎo)致基線噪音，此時(shí)應(yīng)修復(fù)滲漏，重新連接或更換接頭；
4）管路堵塞：除去堵塞，沖洗系統(tǒng)；
5）電噪音：除去來(lái)源，改變電路。
4、基線漂移：上漂或者下漂
1）梯度變化引起，如溶劑Ｂ的吸收值高于溶劑A：使用基線差減，或嘗試新的流動(dòng)相；
2）化合物從色譜柱上洗脫：平衡系統(tǒng)，直至基線穩(wěn)定；如樣品中有保留非常強(qiáng)的組分，可設(shè)置強(qiáng)洗脫程序；
3）溶劑改變（氣體吸附，蒸發(fā)）：氦氣脫氣，隔離溶劑；
4）溶劑滲漏：擰緊或者更換接頭；
5）檢測(cè)器溫度影響（尤其是示差，電化學(xué)以及電導(dǎo)檢測(cè)器）：流動(dòng)池溫度調(diào)節(jié)；
6）柱溫波動(dòng)：等待柱溫平穩(wěn)，使用柱預(yù)加熱器；
7）壓力變化：過(guò)濾溶劑以及樣品，或樣品太粘稠；
8）混合問(wèn)題：更換一個(gè)體積更大的Mixer，以增加系統(tǒng)體積。
5、Cyclic基線
1）溫度影響：隔離熱源，或搬離臨近的通風(fēng)口，或增加流動(dòng)池溫度；
2）混合問(wèn)題：更換一個(gè)體積更大的Mixer，以增加系統(tǒng)體積；
3）流動(dòng)相中的氣體：溶劑脫氣；
4）泵不穩(wěn)定：檢查維修泵；
5）管路堵塞：沖洗系統(tǒng)，排除并除去堵塞源頭；
6）電問(wèn)題：改變電路，或除去根源。
6、基線上的毛刺
1）氣泡：溶劑脫氣，并重新灌注泵，流動(dòng)相脫氣越好，基線就會(huì)越好；
2）信號(hào)連接不好，連線變松：清潔并擰緊檢測(cè)器上的導(dǎo)線，或檢查連線是否有損壞，或更換鏟形接線片；
3）燈繼電器試圖點(diǎn)燃熄滅的燈：更換燈；
4）電噪音：更換電路，或除去根源。
7、小結(jié)
1）確保無(wú)電源及電噪音干擾；
2）為避免基線噪音，確保儀器系統(tǒng)內(nèi)無(wú)氣泡或空氣，流動(dòng)相首選過(guò)濾脫氣；排盡管路、進(jìn)樣器、檢測(cè)池中的氣泡；選擇合適的接頭和管路，防止?jié)B漏；
3）在編輯方法時(shí)，針對(duì)HPLC和UPLC儀器UV檢測(cè)器設(shè)置合適的采樣頻率，HPLC推薦1-5Hz，UPLC推薦20Hz；
4）保持良好的操作習(xí)慣，如UPLC儀器水相流動(dòng)相每天更換，添加了緩沖鹽的流動(dòng)相過(guò)0.2μｍ溶劑過(guò)濾膜等，都會(huì)減小基線噪音的產(chǎn)生。
文章來(lái)源：網(wǎng)絡(luò)
