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內(nèi)標(biāo)法和外標(biāo)法都是常用的定量分析方法，在不同的分析條件下，面對不同的要求，再加上分析成本和效率等因素的考慮，靈活選用簡單而有效的定量方法很重要。那么，如何選用內(nèi)標(biāo)法或外標(biāo)法？它們各有什么優(yōu)缺點(diǎn)？本期我們特整理了相關(guān)內(nèi)容，希望對大家有所幫助！
| 01. 外標(biāo)法定義及優(yōu)缺點(diǎn)
| 02. 內(nèi)標(biāo)法定義及優(yōu)缺點(diǎn)
| 03. 選用案例解析
一、外標(biāo)法定義及優(yōu)缺點(diǎn)
1. 什么是外標(biāo)法？
用待測組分的已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液（作為對照物）繪制校準(zhǔn)曲線，以對照物質(zhì)和樣品中待測組分的響應(yīng)信號相比較進(jìn)行定量的方法，稱為外標(biāo)法。
具體做法是：用待測組分的標(biāo)準(zhǔn)樣品配制成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)系列，在與待測組分相同的色譜條件下，等體積準(zhǔn)確量進(jìn)樣，測量各峰的峰面積或峰高，用峰面積或峰高對樣品濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，此標(biāo)準(zhǔn)工作曲線應(yīng)是通過原點(diǎn)的直線。
若標(biāo)準(zhǔn)工作曲線不通過原點(diǎn)，說明測定方法存在系統(tǒng)誤差。標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的斜率即為絕對校正因子。
2. 外標(biāo)法優(yōu)缺點(diǎn)
優(yōu)點(diǎn)：
（1）操作、計(jì)算簡單；
（2）無需各組分都被檢出、洗脫；
（3）適用于大量樣品的分析。
缺點(diǎn)：
（1）實(shí)驗(yàn)條件要求高，標(biāo)樣及未知樣品的測定條件要一致，如：檢測器的靈敏度，流速、流動相組成不能發(fā)生變化；
（2）進(jìn)樣體積要準(zhǔn)確，每次進(jìn)樣體積要有好的重復(fù)性。
二、內(nèi)標(biāo)法定義及優(yōu)缺點(diǎn)
1. 什么是內(nèi)標(biāo)法？
內(nèi)標(biāo)法是一種間接的校準(zhǔn)方法，是在建立校準(zhǔn)曲線時(shí)，每個(gè)校準(zhǔn)序列里加入相同量的物質(zhì)作為內(nèi)標(biāo)物，根據(jù)被測試樣和內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量比及其相應(yīng)的色譜峰面積之比，來計(jì)算被測組分的含量。
具體做法是：在樣品中加入一定量的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，它可被色譜柱所分離，又不受試樣中其它組分峰的干擾，只要測定內(nèi)標(biāo)物和待測組分的峰面積與相對響應(yīng)值，即可求出待測組分在樣品中的百分含量。
內(nèi)標(biāo)法定量圖例
2. 內(nèi)標(biāo)法的優(yōu)缺點(diǎn)
一般用外標(biāo)法來定量，如果進(jìn)樣體積很難掌握，就用內(nèi)標(biāo)法，可以消除進(jìn)樣體積的誤差。那內(nèi)標(biāo)法有哪些優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)，一起看一下：
優(yōu)點(diǎn)：
進(jìn)樣量的變化、色譜條件的微小變化，對內(nèi)標(biāo)法定量結(jié)果的影響不大，特別是在樣品前處理（如濃縮、萃取、衍生化等）前加入內(nèi)標(biāo)物，然后再進(jìn)行前處理時(shí)，可部分補(bǔ)償欲測組分在樣品前處理時(shí)的損失。若要獲得很高精度的結(jié)果時(shí)，可以加入數(shù)種內(nèi)標(biāo)物，以提高定量分析的精度。
缺點(diǎn)：
（1）內(nèi)標(biāo)法必須每個(gè)樣品中都加入內(nèi)標(biāo)物，增加了工作量也增加了成本；
（2）在進(jìn)行多組分分析時(shí)，必須保證內(nèi)標(biāo)物有足夠的分離度，加大了方法建立難度；
（3）作為內(nèi)標(biāo)物的要求較高，并不容易選擇。
3、 內(nèi)標(biāo)物的選擇原則
對于內(nèi)標(biāo)法定量分析來說，內(nèi)標(biāo)物的選擇是極其重要的。內(nèi)標(biāo)物必須滿足如下的條件：
（1）內(nèi)標(biāo)物必須是試樣中不存在的物質(zhì)；
（2）應(yīng)當(dāng)是純凈的己知化合物，且內(nèi)標(biāo)物和被測組分要有基本相同或盡可能一致的物理化學(xué)性質(zhì)(如：沸點(diǎn)、極性、化學(xué)結(jié)構(gòu)等)、色譜行為和響應(yīng)特征；
（3）必須完全溶于被測樣品(或溶劑)中，且不與被測樣品起化學(xué)反應(yīng)并與試樣中各組分的色譜峰能完全分離；
（4）加入的內(nèi)標(biāo)物的量應(yīng)接近于被測組分；
（5）色譜峰的位置應(yīng)與被測組分的色譜峰的位置相近或在幾個(gè)被測組分色譜峰中間。且又不共溢出，目的是為了避免儀器的不穩(wěn)定性所造成的靈敏度的差異；
（6）選擇合適的內(nèi)標(biāo)物加入量，使得內(nèi)標(biāo)物和被分析物質(zhì)二者峰面積的匹配性大于75%，以免由于它們處在不同響應(yīng)值區(qū)域而導(dǎo)致的靈敏度偏差。
三、選用案例解析
其實(shí)，內(nèi)標(biāo)法與外標(biāo)法都是定量的一種方法，至于哪一種方法好與不好，不能一概而論，還是要不同情況不同分析，我們摘取了幾個(gè)網(wǎng)友的案例，方便大家理解：
1
案例1
“以前做過很多醫(yī)藥、農(nóng)藥中間體的芳香族鹵代化合物的常量定量分析，沒有自動進(jìn)樣器，用外標(biāo)法定量，確實(shí)重現(xiàn)性與穩(wěn)定性非常差。
其實(shí)，仔細(xì)分析原因不一定就是外標(biāo)法不適合這種定量分析，首先我們應(yīng)確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室儀器和條件是否調(diào)整到了一種穩(wěn)定而合理的狀態(tài)。
比如，襯管是否潔凈，玻璃棉的位置是否合適恰當(dāng)（能否使樣品盡可能的汽化），汽化溫度是否合適，色譜峰形是否對稱（也就是樣品與色譜柱健合相是否匹配），附近有沒有其它色譜峰的干擾，選用什么進(jìn)樣方式（如快速進(jìn)樣還是熱針進(jìn)樣）。
如果這些因素都考慮了，按照GMP方法驗(yàn)證對于精密度的要求，同一樣品進(jìn)6針以上的RSD和配制6個(gè)樣品的定量結(jié)果RSD都能滿足小于1.5%的要求，那么這個(gè)方法用外標(biāo)法就是完全適用的。在做過的許多出口產(chǎn)品的定量分析方法當(dāng)中，有許多是一些醫(yī)藥公司提供的比較完善而驗(yàn)證過的方法，內(nèi)標(biāo)與外標(biāo)都有（用的都是自動進(jìn)樣），精密度都能滿足RSD小于1.5%的要求。
當(dāng)一個(gè)方法能夠滿足測試要求的時(shí)候，無論內(nèi)標(biāo)外標(biāo)，都是可行的。當(dāng)然有一個(gè)分析成本和分析時(shí)間的問題，內(nèi)標(biāo)的成本和控制溶液、樣品溶液的配制當(dāng)然要比外標(biāo)要高和麻煩一些了。
而有些時(shí)候，可能受你實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有儀器和附屬設(shè)備的影響，達(dá)不到一定的要求，還必須進(jìn)行定量分析，有時(shí)外標(biāo)的結(jié)果可能就要差一些。這時(shí)，你可能就要考慮用內(nèi)標(biāo)法了，可以排除手動進(jìn)樣的誤差、分流歧視的影響、包括一些未知因素平行誤差的影響，這時(shí)內(nèi)標(biāo)可能就顯示出它的優(yōu)勢來了。”
2
案例2
“ 對于微量分析，比如農(nóng)藥和獸藥殘留的分析、環(huán)境分析等，根據(jù)不同的限量標(biāo)準(zhǔn)要求，對于精密度的要求也比常量分析的要求要寬松得多，RSD有時(shí)可以允許達(dá)到10%甚至更高，這時(shí)可能外標(biāo)法有更大的應(yīng)用空間。”
文章來源：網(wǎng)絡(luò)
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一、外標(biāo)法定義及優(yōu)缺點(diǎn)
1. 什么是外標(biāo)法？
用待測組分的已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液（作為對照物）繪制校準(zhǔn)曲線，以對照物質(zhì)和樣品中待測組分的響應(yīng)信號相比較進(jìn)行定量的方法，稱為外標(biāo)法。
具體做法是：用待測組分的標(biāo)準(zhǔn)樣品配制成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)系列，在與待測組分相同的色譜條件下，等體積準(zhǔn)確量進(jìn)樣，測量各峰的峰面積或峰高，用峰面積或峰高對樣品濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，此標(biāo)準(zhǔn)工作曲線應(yīng)是通過原點(diǎn)的直線。
若標(biāo)準(zhǔn)工作曲線不通過原點(diǎn)，說明測定方法存在系統(tǒng)誤差。標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的斜率即為絕對校正因子。
2. 外標(biāo)法優(yōu)缺點(diǎn)
優(yōu)點(diǎn)：
（1）操作、計(jì)算簡單；
（2）無需各組分都被檢出、洗脫；
（3）適用于大量樣品的分析。
缺點(diǎn)：
（1）實(shí)驗(yàn)條件要求高，標(biāo)樣及未知樣品的測定條件要一致，如：檢測器的靈敏度，流速、流動相組成不能發(fā)生變化；
（2）進(jìn)樣體積要準(zhǔn)確，每次進(jìn)樣體積要有好的重復(fù)性。
二、內(nèi)標(biāo)法定義及優(yōu)缺點(diǎn)
1. 什么是內(nèi)標(biāo)法？
內(nèi)標(biāo)法是一種間接的校準(zhǔn)方法，是在建立校準(zhǔn)曲線時(shí)，每個(gè)校準(zhǔn)序列里加入相同量的物質(zhì)作為內(nèi)標(biāo)物，根據(jù)被測試樣和內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量比及其相應(yīng)的色譜峰面積之比，來計(jì)算被測組分的含量。
具體做法是：在樣品中加入一定量的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，它可被色譜柱所分離，又不受試樣中其它組分峰的干擾，只要測定內(nèi)標(biāo)物和待測組分的峰面積與相對響應(yīng)值，即可求出待測組分在樣品中的百分含量。
內(nèi)標(biāo)法定量圖例
2. 內(nèi)標(biāo)法的優(yōu)缺點(diǎn)
一般用外標(biāo)法來定量，如果進(jìn)樣體積很難掌握，就用內(nèi)標(biāo)法，可以消除進(jìn)樣體積的誤差。那內(nèi)標(biāo)法有哪些優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)，一起看一下：
優(yōu)點(diǎn)：
進(jìn)樣量的變化、色譜條件的微小變化，對內(nèi)標(biāo)法定量結(jié)果的影響不大，特別是在樣品前處理（如濃縮、萃取、衍生化等）前加入內(nèi)標(biāo)物，然后再進(jìn)行前處理時(shí)，可部分補(bǔ)償欲測組分在樣品前處理時(shí)的損失。若要獲得很高精度的結(jié)果時(shí)，可以加入數(shù)種內(nèi)標(biāo)物，以提高定量分析的精度。
缺點(diǎn)：
（1）內(nèi)標(biāo)法必須每個(gè)樣品中都加入內(nèi)標(biāo)物，增加了工作量也增加了成本；
（2）在進(jìn)行多組分分析時(shí)，必須保證內(nèi)標(biāo)物有足夠的分離度，加大了方法建立難度；
（3）作為內(nèi)標(biāo)物的要求較高，并不容易選擇。
3、 內(nèi)標(biāo)物的選擇原則
對于內(nèi)標(biāo)法定量分析來說，內(nèi)標(biāo)物的選擇是極其重要的。內(nèi)標(biāo)物必須滿足如下的條件：
（1）內(nèi)標(biāo)物必須是試樣中不存在的物質(zhì)；
（2）應(yīng)當(dāng)是純凈的己知化合物，且內(nèi)標(biāo)物和被測組分要有基本相同或盡可能一致的物理化學(xué)性質(zhì)(如：沸點(diǎn)、極性、化學(xué)結(jié)構(gòu)等)、色譜行為和響應(yīng)特征；
（3）必須完全溶于被測樣品(或溶劑)中，且不與被測樣品起化學(xué)反應(yīng)并與試樣中各組分的色譜峰能完全分離；
（4）加入的內(nèi)標(biāo)物的量應(yīng)接近于被測組分；
（5）色譜峰的位置應(yīng)與被測組分的色譜峰的位置相近或在幾個(gè)被測組分色譜峰中間。且又不共溢出，目的是為了避免儀器的不穩(wěn)定性所造成的靈敏度的差異；
（6）選擇合適的內(nèi)標(biāo)物加入量，使得內(nèi)標(biāo)物和被分析物質(zhì)二者峰面積的匹配性大于75%，以免由于它們處在不同響應(yīng)值區(qū)域而導(dǎo)致的靈敏度偏差。
三、選用案例解析
其實(shí)，內(nèi)標(biāo)法與外標(biāo)法都是定量的一種方法，至于哪一種方法好與不好，不能一概而論，還是要不同情況不同分析，我們摘取了幾個(gè)網(wǎng)友的案例，方便大家理解：
1
案例1
“以前做過很多醫(yī)藥、農(nóng)藥中間體的芳香族鹵代化合物的常量定量分析，沒有自動進(jìn)樣器，用外標(biāo)法定量，確實(shí)重現(xiàn)性與穩(wěn)定性非常差。
其實(shí)，仔細(xì)分析原因不一定就是外標(biāo)法不適合這種定量分析，首先我們應(yīng)確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室儀器和條件是否調(diào)整到了一種穩(wěn)定而合理的狀態(tài)。
比如，襯管是否潔凈，玻璃棉的位置是否合適恰當(dāng)（能否使樣品盡可能的汽化），汽化溫度是否合適，色譜峰形是否對稱（也就是樣品與色譜柱健合相是否匹配），附近有沒有其它色譜峰的干擾，選用什么進(jìn)樣方式（如快速進(jìn)樣還是熱針進(jìn)樣）。
如果這些因素都考慮了，按照GMP方法驗(yàn)證對于精密度的要求，同一樣品進(jìn)6針以上的RSD和配制6個(gè)樣品的定量結(jié)果RSD都能滿足小于1.5%的要求，那么這個(gè)方法用外標(biāo)法就是完全適用的。在做過的許多出口產(chǎn)品的定量分析方法當(dāng)中，有許多是一些醫(yī)藥公司提供的比較完善而驗(yàn)證過的方法，內(nèi)標(biāo)與外標(biāo)都有（用的都是自動進(jìn)樣），精密度都能滿足RSD小于1.5%的要求。
當(dāng)一個(gè)方法能夠滿足測試要求的時(shí)候，無論內(nèi)標(biāo)外標(biāo)，都是可行的。當(dāng)然有一個(gè)分析成本和分析時(shí)間的問題，內(nèi)標(biāo)的成本和控制溶液、樣品溶液的配制當(dāng)然要比外標(biāo)要高和麻煩一些了。
而有些時(shí)候，可能受你實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有儀器和附屬設(shè)備的影響，達(dá)不到一定的要求，還必須進(jìn)行定量分析，有時(shí)外標(biāo)的結(jié)果可能就要差一些。這時(shí)，你可能就要考慮用內(nèi)標(biāo)法了，可以排除手動進(jìn)樣的誤差、分流歧視的影響、包括一些未知因素平行誤差的影響，這時(shí)內(nèi)標(biāo)可能就顯示出它的優(yōu)勢來了。”
2
案例2
“ 對于微量分析，比如農(nóng)藥和獸藥殘留的分析、環(huán)境分析等，根據(jù)不同的限量標(biāo)準(zhǔn)要求，對于精密度的要求也比常量分析的要求要寬松得多，RSD有時(shí)可以允許達(dá)到10%甚至更高，這時(shí)可能外標(biāo)法有更大的應(yīng)用空間。”
文章來源：網(wǎng)絡(luò)
