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微生物實驗的滅菌方法相關知識

放大字體  縮小字體 發布日期:2023-07-31
核心提示:一滅菌法定義用適當的物理或化學手段將物品中活的微生物殺滅或除去的方法。適用于制劑、原料、輔料、醫療器械等的滅菌。滅菌是指



滅菌法定義

用適當的物理或化學手段將物品中活的微生物殺滅或除去的方法。適用于制劑、原料、輔料、醫療器械等的滅菌。

滅菌是指將物品中污染的微生物殘存概率下降至一定水平,以無菌保證水平SAL(Sterility  Assurance  Level)表示。

 



滅菌程序驗證內容

1、撰寫驗證方案及制定評估標準。

2、確認滅菌設備技術資料齊全、安裝正確,并能處于正常運行。

3、確認關鍵設備控制儀表在規定的參數范圍內能正常運行。

4、采用被滅菌物品或模擬物品進行重復實驗確認滅菌效果符合規定。

5、完善文件記錄,撰寫驗證報告。



滅菌程序運行監控

1、 關鍵參數應在驗證確定的范圍內:溫度、壓力、時間、濕度、滅菌氣體濃度、輻照劑量等

2、滅菌程序定期驗證,時效不超過半年。

3、滅菌設備或程序發生變更重新進行驗證。



滅菌保證

1、滅菌效果與滅菌前產品污染程度及污染菌特性有關,把握微生物污染水平及污染菌耐受性,注意各個環節降低污染程度。

2、滅菌冷卻階段防止已滅菌物品再次污染。

3、適用生物指示劑、化學指示劑等監控滅菌結果。



生物指示劑

基本要求:

1、菌種的耐受性應大于需滅菌產品中所有可能污染菌的耐受性。

2、菌種應無致病性。

3、菌株應穩定,存活期長,易于保存。

4、 易于培養。若使用休眠孢子,孢子含量在90%以上。



常用生物指示劑

1、濕熱滅菌:嗜熱脂肪芽孢桿菌孢子(ATCC7953等,活孢子數為5×105~5×106個/片 )

2、干熱滅菌:枯草芽孢桿菌孢子(ATCC9372等,活孢子數為5×105~5×106個/片 )

3、輻射滅菌:短小芽孢桿菌孢子(ATCC27142等,活孢子數為5×107~5×108個/片 )

4、氣體滅菌:

 環氧乙烷滅菌:枯草芽孢桿菌孢子(ATCC9372等,活孢子數為5×105~5×106個/片 );

氣態過氧化氫滅菌:嗜熱脂肪芽孢桿菌孢子(ATCC7953等,活孢子數為1×106~5×106個/片 );

過濾除菌法:缺陷假單胞菌( ATCC19146等)。



滅菌方法

方法:濕熱滅菌法、干熱滅菌法、輻射滅菌法、氣體滅菌法、過濾除菌法。

根據滅菌物品特性選擇一種或幾種方法組合滅菌。只要產品允許,盡可能選用最終滅菌法。

 

(一)、濕熱滅菌法

濕熱滅菌法是指在高溫高壓條件下利用沸水、蒸氣變性微生物菌體中的蛋白質、核酸而達到滅菌效果的方法。

濕熱滅菌法效果可靠、操作簡便;應用廣泛,如容器、培養基、無菌衣、膠塞等;包括熱壓滅菌、流通蒸汽滅菌、 煮沸滅菌、低溫間歇滅菌。

濕熱滅菌條件:

1、121℃× 15min、 121℃× 30min 、116 × 40min 或其他可以保證滅菌效果的程序條件。

2、過度殺滅法。

3、滅菌過程有適當的裝載方式,保證滅菌有效均一。

滅菌容器操作注意:

1、使用前認真檢查設備的完好性;

2、滅菌時須先將滅菌器中冷空氣排出,以保證最佳滅菌效果;

3、滅菌時間應從待滅菌物品到達預定溫度時算起;

4、滅菌完畢后停止加熱,待壓力表降至0,放汽、開啟滅菌器,物品溫度降至80℃ 以下時才能將滅菌器門全部開啟。

影響濕熱滅菌的因素:

1、微生物種類和數量;

2、滅菌物品特性;

3、蒸汽的性質:飽和蒸汽熱含量高、潛熱大、穿透力強;濕飽和蒸汽熱含量低、過熱蒸汽穿透力差;

4、滅菌時間等。

(二)、干熱滅菌法

利干熱滅菌法用干熱空氣達到殺滅微生物或消除熱原的方法。

適用范圍:耐高溫但不宜使熱滅菌法滅菌的物品,如玻璃物品、金屬物品、纖維制品、固體試藥、液體石蠟等

干熱滅菌條件:

1、160~170℃× 120min、 170~180℃× 60min、250 ℃× 45min以上。

2、滅菌過程有適當的裝載方式,保證滅菌有效均一。

干熱滅菌效果:

1、繁殖型細菌100℃ /1h可殺滅;

2、耐熱細菌: 120℃ 長時間不死亡,140 ℃殺菌率劇增。(三)、火焰滅菌

置于火焰上直接灼燒,簡便、可靠。

(四)、輻射滅菌法

將滅菌物品置于適宜放射源輻射的射線或適意的電子加速其發生的電子束中進行電離輻射而達到殺滅微生物的方法。

常用60Co-γ射線;用于醫療器械、容器、生產輔助用品、不受輻射破壞的原料藥及成品等。參數:輻射劑量。

輻射滅菌特點:

1、γ射線 ,60Co穿透力強;

2、β射線,由電子加速器產生,穿透力弱,滅菌效果差;

3、不升高溫度;

4、設備費用高;

5、輻射能引起一些藥物pH值、含量、活性等改變,某些制品不宜選用。

(五)、氣體滅菌法

用化學消毒劑形成的氣體殺滅微生物的方法,常用環氧乙烷、氣態過氧化氫、甲醛、臭氧等。適用于醫療器械、塑料制品等,能吸附環氧乙烷的物品不宜采用。控制參數:溫度、相對濕度、滅菌壓力、滅菌時間等。

(六)、過濾除菌法

利用細菌不能通過致密具孔濾材的原理除去氣體或液體中的微生物。用于熱不穩定的藥品或原料除菌;濾膜材料確定。

濾膜孔徑要求

1、繁殖型微生物1um,芽孢約0.5um或以下;

2、0.45um可濾去大多數細菌,0.15um可濾去熱原。

(七)、物理滅菌法

(八)、化學滅菌法


編輯:songjiajie2010

 
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