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“乳制品微生物實(shí)驗(yàn)室技能提升培訓(xùn)班”
線上直播完美收官
課程結(jié)束后
小伙伴們提出了工作中的一些疑問
雖然老師進(jìn)行了耐心的解答
小伙伴們感覺有些問題理解不到位
希望有文稿版的
利于鞏固學(xué)習(xí)
小編根據(jù)小伙伴們反饋的問題
對于老師們的答疑進(jìn)行一一整理
由于內(nèi)容較多
將分批分享給大家
請各位小伙伴查收今日份的知識
1.微生物試劑盒法測定中，試劑盒測定結(jié)果與傳統(tǒng)法結(jié)果差別大的原因是什么？
傳統(tǒng)試管法和試劑盒方法原理相同，但反應(yīng)體系、培養(yǎng)時(shí)間都有差異，但實(shí)際中發(fā)現(xiàn)兩種方法結(jié)果未有太大差異，如果兩種方法結(jié)果差異較大，建議從人、機(jī)、料、法、環(huán)等各個(gè)細(xì)節(jié)查找原因，關(guān)鍵要熟練操作。
2.微生物試劑盒法測定中，不同人員在相同條件下測定結(jié)果差別大的原因是什么？
微生物法測維生素，無論是傳統(tǒng)法還是試劑盒，建議實(shí)驗(yàn)室固定每個(gè)項(xiàng)目的檢驗(yàn)人員，至少保證一個(gè)項(xiàng)目2個(gè)人員操作，以保證數(shù)據(jù)的穩(wěn)定，然后制定SOP，規(guī)定不同人員操作的變異系數(shù)差異允許范圍。
3.微生物試劑盒法測定中，怎樣確保樣品稀釋在標(biāo)準(zhǔn)曲線之內(nèi)？
如果是樣品類型和含量比較固定，依靠經(jīng)驗(yàn)常規(guī)重復(fù)操作即可。如果是未知樣品，首先參考標(biāo)簽標(biāo)識，按照標(biāo)準(zhǔn)的含量推算和預(yù)判含量，如果不能確定某一個(gè)含量，一個(gè)樣品做2-3個(gè)稀釋度，保證某一個(gè)稀釋度在標(biāo)曲范圍內(nèi)。
4.微生物法測定中，空白對照混濁如何解決？
空白對照有未接種空白和接種空白兩種，如果是未接種空白渾濁，除去培養(yǎng)基基質(zhì)的問題，最大的可能就是污染；接種空白渾濁，除去培養(yǎng)基和污染的因素，還有一個(gè)原因就是菌株發(fā)生變異，建議純化到MRS平板上，再挑單菌落，在進(jìn)行傳代，如果還是不理想，建議更換菌株。
5.老師，如果我的穿刺保藏的工作菌株保存3個(gè)月（標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定保存1個(gè)月）后仍能傳代存活，是否可以繼續(xù)使用？
標(biāo)準(zhǔn)上是一個(gè)月傳一代，目的為了保證菌株的活性。如果一定要保存3個(gè)月，中間應(yīng)該增加對菌株的驗(yàn)證，反倒麻煩。
6.葉酸和VB12檢測時(shí)，在待測液制作環(huán)節(jié)時(shí)，您強(qiáng)調(diào)培養(yǎng)基煮沸后立即晾涼，我們實(shí)際應(yīng)用是煮沸后自然晾晾，沒有立即冷卻，煮沸后到培養(yǎng)基使用大概用時(shí)2h
立即冷卻，避免培養(yǎng)基顏色變深。
7.老師，理解玻璃器皿泡酸是為了使器皿更加干凈，具體原因是什么呢？
都是為了保證玻璃器皿無殘留，洗刷方式可以根據(jù)各自實(shí)驗(yàn)室規(guī)定的操作過程進(jìn)行操作，最終目的就是為了洗刷干凈無殘留。高溫烘干這步是必須的。
8.老師，請問從種子培養(yǎng)液中接種到接種液中，接種量是i多少？ 接種量不同會(huì)對結(jié)果有影響嗎？種子培養(yǎng)液為什么在接種到培養(yǎng)液，是為了活化傳代嗎？
為了增加活性，如果是傳代的話一般100微升。接種量不同對結(jié)果沒有影響，培養(yǎng)時(shí)間可能會(huì)有改變。
9.老師，加標(biāo)的中間液是滅菌前加入還是滅菌后？還是哪一個(gè)步驟加進(jìn)去？
是滅菌前加入，為了保證和樣品處理再同一條件下。
10.老師，我可以用吸光度值為橫坐標(biāo)，生物素含量為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線嗎？
可以，看操作習(xí)慣，但是標(biāo)準(zhǔn)中明確了生物素含量為橫坐標(biāo)。
11.四個(gè)維生素實(shí)驗(yàn)中避光是自然光還是所有光源？
避開自然光。
12.生物素測定在調(diào)pH值時(shí)，超過了規(guī)定的pH之后，可以用鹽酸調(diào)回來嗎，會(huì)影響結(jié)果嗎？
不可以用HCl調(diào)回，如果需要pH值調(diào)回，需要用H2SO4，不額外引入氯離子。
13.用玻璃具塞試管可以代替鋼管帽嗎？
這里的玻璃具塞說的是膠塞是么，不建議使用，一是膠塞不能放到170℃以上的烘干箱烘干。而是在滅菌過程中氣體壓力改變會(huì)導(dǎo)致體積發(fā)生變化。實(shí)驗(yàn)室可以訂制不銹鋼材質(zhì)的試管帽。
14.是否可以增加S2-S10的標(biāo)曲濃度，如 乘以十倍?
標(biāo)準(zhǔn)給出的濃度范圍，是菌液和標(biāo)準(zhǔn)出現(xiàn)適宜濃度梯度的范圍，如果提高濃度，可能導(dǎo)致標(biāo)準(zhǔn)曲線沒有梯度，實(shí)驗(yàn)失敗。
15.老師，請問進(jìn)行生物素試劑盒法方法驗(yàn)證時(shí)，是需要用質(zhì)控樣還是用市場購買的奶粉就行？還有，是只需要采用試劑盒方法測定結(jié)果計(jì)算精密度、準(zhǔn)確度等，還是要同時(shí)進(jìn)行國標(biāo)法測定后進(jìn)行兩種方法的結(jié)果比較
方法驗(yàn)證是對該試劑盒在本實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的使用和國標(biāo)的符合程度，在人員不足、工作量較大的情況下作為國標(biāo)方法的替代，所以對照的樣品建議用本工廠內(nèi)的樣品，也可以購買質(zhì)控樣和市售產(chǎn)品，對驗(yàn)證的樣品進(jìn)行國標(biāo)法的檢測，再在同樣的實(shí)驗(yàn)條件下，用試劑盒對該樣品測定，實(shí)驗(yàn)室自己設(shè)置可以接受的變異范圍，然后對試劑盒的效果評價(jià)，參與評價(jià)的因素一定要包括準(zhǔn)確度和精密度，由于試劑盒本身有檢出限和定量限，建議聯(lián)系試劑盒的供應(yīng)商參與驗(yàn)證。可以參考的標(biāo)準(zhǔn)《商品化食品檢測試劑盒方法評價(jià)》（SN/T2775-2011)；《微生物檢測方法確認(rèn)和驗(yàn)證指南》（RBT033-2020）。
