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大家好
告別期盼已久的新年假期
迎來緊鑼密鼓的開工日子
迎著開工的陽光
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節(jié)前1月21-22日
“食品微生物實(shí)驗(yàn)室技能提升專題培訓(xùn)班”
線上直播完美收官
課程結(jié)束后
小伙伴們提出了工作中的一些疑問
雖然老師進(jìn)行了耐心的解答
小伙伴們感覺有些問題理解不到位
希望有文稿版的
利于鞏固學(xué)習(xí)
小編根據(jù)小伙伴們反饋的問題
經(jīng)過認(rèn)真回聽課程
對于老師們的答疑進(jìn)行一一整理
由于內(nèi)容較多
將分批分享給大家
請各位小伙伴查收今日份的知識
標(biāo)準(zhǔn)菌株存活性怎么進(jìn)行？
答：標(biāo)準(zhǔn)菌株存活性就是其的復(fù)活過程，我們購買的標(biāo)準(zhǔn)菌株一般是凍干粉或者凍干管，然后我們要對其進(jìn)行復(fù)活培養(yǎng)，這個過程是必須的，否則我們沒有辦法使用。針對其存活性的驗(yàn)證，所有的標(biāo)準(zhǔn)法規(guī)中都是其存活性的判斷，一個定性的判斷。復(fù)活的過程對其進(jìn)行打管，按照標(biāo)準(zhǔn)要求進(jìn)行培養(yǎng)，如果接種到液體培養(yǎng)，有肉眼可見的渾濁或者進(jìn)一步鏡檢時有目標(biāo)微生物生長；如果接種到固體培養(yǎng)上，有肉眼可見的菌落，這些都叫存活性合格。
什么算標(biāo)準(zhǔn)菌株的商業(yè)衍生物？
答：標(biāo)準(zhǔn)菌株的商業(yè)衍生物是根據(jù)客戶需求生產(chǎn)的一種產(chǎn)品。標(biāo)準(zhǔn)菌株到標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株的過程，我們的法規(guī)對菌株的確認(rèn)、保藏、管理的生物安全要求是很高的，而符合標(biāo)準(zhǔn)的商業(yè)派生菌株可以直接使用。但是商業(yè)派生菌株的可追溯性一定是專業(yè)的標(biāo)準(zhǔn)菌株機(jī)構(gòu)授權(quán)的。
購買的標(biāo)準(zhǔn)菌株，證書上寫的是3代，這個怎么理解從菌種保藏機(jī)構(gòu)獲得的標(biāo)準(zhǔn)菌株為第0代？
答：如果證書上寫的是3代的話，那就是商業(yè)派生菌株，就不是標(biāo)準(zhǔn)菌株，也就不是理解的0代標(biāo)準(zhǔn)菌株。
GB 4789系列什么情況下應(yīng)作陽性對照，假如檢測50批樣品致病菌都是陰性結(jié)果，需要人工污染樣品做陽性對照來做質(zhì)控嗎？
答：GB 4789.1里規(guī)定要定期進(jìn)行，沒有明確說什么時候進(jìn)行。自己實(shí)驗(yàn)室需要制定sop進(jìn)行規(guī)定，比如我們實(shí)驗(yàn)室總是檢出某個致病菌的陽性結(jié)果，就規(guī)定一個月的時間來進(jìn)行陽性對照。保證實(shí)驗(yàn)室人員具有可以持續(xù)進(jìn)行陽性檢出的能力的。最新的RB/T 038-2020 食品微生物檢測結(jié)果質(zhì)量監(jiān)控指南文件里規(guī)定：對于日常質(zhì)量監(jiān)控,應(yīng)執(zhí)行檢測方法的規(guī)定，否則建議每批或每組樣品每20個樣品1次的頻次進(jìn)行；質(zhì)控不一定需要人工污染樣品來做，可以用標(biāo)準(zhǔn)菌株來做陽性和陰性對照。
怎樣確認(rèn)菌株的存活性，純度和關(guān)鍵特征指標(biāo)，怎樣才算合格？
答：存活性第一的問題已經(jīng)講解了。純度要從菌落形態(tài)、顯微鏡里的形態(tài)去確認(rèn)其是否符合其標(biāo)準(zhǔn)形態(tài)；關(guān)鍵特征指標(biāo)根據(jù)預(yù)期使用目的，標(biāo)準(zhǔn)方法的要求對標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行確認(rèn)；存活性生長、純度是純的、關(guān)鍵特征指標(biāo)符合預(yù)期的標(biāo)準(zhǔn)就算合格。
我們已經(jīng)磁珠凍存好菌種了，沒有做菌種確認(rèn)，現(xiàn)在可以補(bǔ)救嗎？菌種在0.85生理鹽水過夜培養(yǎng)，里面沒有營養(yǎng)成分，怎么能叫一代呢？
答：可以補(bǔ)救。一般沒有用0.85生理鹽水過夜培養(yǎng)的，0.85生理鹽水一般是用作稀釋液，不能為標(biāo)準(zhǔn)菌株提供營養(yǎng)液的不能叫一代。
除商業(yè)派生菌株外，從同行中獲得的，也是從認(rèn)可的菌種中心獲得的，是否也認(rèn)可？
答：可以認(rèn)可。但是前提是要有溯源性的文件，拿到后也要對其進(jìn)行確認(rèn)的。
老師，工作菌株和儲存菌株，在文件上有沒有具體要求。在我們自己的文件，冷藏保存，斜面TSA儲存菌株要求7天，液體TSB工作菌株要求3天，對于我們來說，儲存時間有些短，不知道GB有沒有相關(guān)文件要求說明
答：沒有。澳大利亞有個推薦標(biāo)準(zhǔn)有說到斜面可以存儲幾天、液體可以儲存幾天。如果我們實(shí)驗(yàn)室要延長某個或者某一類菌種的儲存，需要進(jìn)行驗(yàn)證其時間是可以的，然后修改我們的文件規(guī)定來延長其保存的時間。
-20℃菌株保存有相關(guān)的可參照標(biāo)準(zhǔn)嗎？
答：沒有。GB 4789.28里說較高的溫度儲存是可以的，但是在較高溫度下貯存時間是多長時間，實(shí)驗(yàn)室要根據(jù)需要進(jìn)行數(shù)據(jù)驗(yàn)證。
比如在供應(yīng)商處買的凍干粉形式的質(zhì)控菌株是商業(yè)派生菌株還是標(biāo)準(zhǔn)菌株？
答：要看供應(yīng)商提供的溯源性文件是誰制造的。
關(guān)鍵特性如何做？
答：要看預(yù)期的目的，比如要做沙門氏菌就要看其關(guān)鍵特性是否符合沙門氏菌的特性。
人工污染樣品菌懸液的濃度如何確定？
答： 人工污染樣品就是要模擬天然的樣品，人工污染樣品菌懸液的濃度就要參考實(shí)際樣品中的這種菌種的濃度來定，如果實(shí)際樣品檢出率很低或者沒有檢出過，那么它的可能存在的濃度是很低的，你的人工污染樣品菌懸液的濃度也要降低（比如100CFU左右）來做。
請問買的定量工作菌株（100cfu直接用的）可以直接用嗎，要驗(yàn)收嗎？
答：可以直接用的，對于驗(yàn)收沒有硬性的規(guī)定。你可以信息層面的驗(yàn)收。一般的定量工作菌株生產(chǎn)商都有一個嚴(yán)格的控制的，比如對運(yùn)輸?shù)姆�(wěn)定性也是做了評估的，買的定量工作菌株要是專業(yè)的機(jī)構(gòu)的。
植物乳桿菌用什么培養(yǎng)基做純化，和做什么關(guān)鍵特性呢？
答： 植物乳桿菌就用MS就可以，關(guān)鍵特性要看標(biāo)準(zhǔn)的要求。
菌種保存是否一定要-70度保存，可以-50度保存嗎？
答： 要根據(jù)設(shè)備的特性來的，-70度的冰箱你可以調(diào)到-50度保存，但是提高溫度對其長期的保存會有影響的，保存期要進(jìn)行驗(yàn)證的。
已經(jīng)凍存好的標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株每年都需要確認(rèn)么？
答： 如果按照設(shè)備的條款下的話，每年要進(jìn)行一次期間核查的要求，相當(dāng)于每年要做一次確認(rèn)。不同的核查老師對這個要求掌握是不一樣的。個人認(rèn)為，從專業(yè)的角度講每年進(jìn)行一次確認(rèn)還是有必要的。
標(biāo)準(zhǔn)菌株具體怎么去做陽性、陰性對照， 直接加入樣品當(dāng)成樣品去嗎？
答：不是的，如果陽性、陰性對照直接加入樣品里，沒有檢出來的話，你就沒有辦法判斷你添加的數(shù)量不對還是你的菌株有問題。建議直接用純的陽性、陰性菌株來做對照。
2代-80度凍干磁珠管取出一顆磁珠置BHI過夜培養(yǎng)，培養(yǎng)后菌懸液再劃斜面，是不是斜面就是第四代了？BHI過夜培養(yǎng)的目的不是復(fù)活菌株么，能算一代嗎？
答：是的，斜面就是第四代了，BHI過夜培養(yǎng)肯定算一代的（因?yàn)?/span>BHI為菌株提供營養(yǎng)）。
標(biāo)準(zhǔn)菌株從同行獲得，但菌種清單會有購買單位，不是本單位，然后菌種說明書之類的復(fù)印過來也是可以的嗎？自己再做好驗(yàn)證確認(rèn)是不是就可以了？
答： 不建議從同行流轉(zhuǎn)的方式獲得。這個溯源鏈有點(diǎn)長，期間的還有運(yùn)輸、包裝的過程，同行也沒辦法為你提供什么時間為你提供菌株的證明。還是建議溯源鏈，從實(shí)驗(yàn)室直接到菌株保藏中心的。
請問老師，制備一定濃度的菌懸液怎么去測這個濃度，除了菌落計(jì)數(shù)法，在有的試驗(yàn)里面這個菌懸液制備了就立馬要用？比如抗菌試驗(yàn)需要用到一定濃度范圍的菌懸液？
答：如果是抗菌試驗(yàn)，你就要預(yù)試驗(yàn)，把前面的菌懸液制備的各個標(biāo)準(zhǔn)做個標(biāo)準(zhǔn)化，保證制備完第二次可以直接用。
標(biāo)準(zhǔn)菌株期間檢查主要檢查些什么？
答： 這個跟確認(rèn)過程是一樣的，確認(rèn)其存活性、純度、關(guān)鍵特性等。
打管復(fù)活時吸取0.5ml液體培養(yǎng)基溶解后全部移到4-5ml液體培養(yǎng)基后打管的殘留影響菌株的濃度嗎？
答：不影響，因?yàn)?/span>打管復(fù)活是定性的過程。
