GB 4789.40-2024《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 克羅諾檢驗》為上述標準之一。標準于2024年2月8日發布，將于2024年8月8日正式實施。

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本文通過對比克羅諾桿菌檢驗2024版與2016版標準，使讀者更好地了解2024版修訂的變更，以便更好地掌握克羅諾檢驗的發展方向。

本標準與GB4789.40-2016相比主要變化如下：

--修改了標準名稱，刪除了阪崎腸桿菌，修改為“食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 克羅諾桿菌檢驗”。

--標準適用范圍增加了嬰幼兒輔助食品;

--增加了PCR鑒定方法作為選做內容;

--刪除了挑取黃色菌落和生化鑒定中的產黃色素和苦杏仁苷項目;

--修改了培養基和試劑pH調節方法;

--修改了預熱、選擇性增菌溫度以及TSA平板的培養溫度和時間;

--修改了生化反應的培養溫度及氨基酸培養基的制備。

5.1 前增菌和選擇性增菌

取檢樣 100g(mL)置于無菌容器中,加入900mL已預熱至 41℃±1℃的 BPW,用手緩緩地搖動至檢樣充分溶解后,36℃±1℃培養18h±2h。輕輕搖動混勻培養過的前增菌液,移取1mL轉入10mLmLST-Vm肉湯中,41.5℃±1℃培養 24h±2h。

5.2 分離

5.2.1 輕輕混勻mLST-Vm肉湯培養物,使用10μL接種環各取1環增菌培養物,分別劃線接種于2個克羅諾桿菌顯色培養基平板,36℃±1℃培養24h±2h,或按培養基要求條件培養。

5.2.2 可疑菌落按顯色培養基要求進行判定,每個平板挑取至少 5個可疑菌落(不足5個時挑取全部可疑菌落) ,分別劃線接種于TSA平板,36℃±1℃培養 24h±2h。

3.增加PCR鑒定方法：隨著微生物檢驗對快速方法的檢測需求， GB標準中引入PCR法，即可節省檢測時間，減少工作量，又可以提高結果的準確性，實現對可疑菌落高通量的篩選。

5.4 確證試驗

選做5.3時,自PCR結果陽性的TSA平板上挑取菌落進行生化鑒定, PCR結果陰性的TSA平板不再進行生化鑒定。

未選做 5.3時 ,直接將 5.2.2的可疑菌落接種TSA平板后進行生化鑒定。

可以首先鑒定克羅諾桿菌顯色培養基平板上最具特征性的菌落接種的TSA平板上的菌落。如果是陽性,則不需要測試其他TSA平板上的菌落。如果是陰性,則選取其他TSA平板上的菌落進行鑒定,直到全部為陰性或發現陽性菌落為止。為確保結果的準確性,對TSA平板上的菌落進行鑒定時,應使用新鮮的傳代菌落�？肆_諾桿菌的主要生化特征見表3。 

上述鑒定也可選擇商生化特征見表3。上述鑒定也可選擇商品化生化鑒定試劑盒或微生物生化鑒定系統進行 。

6 結果與報告

根據菌落特征、確證試驗(生化鑒定)和/或PCR鑒定結果,報告 100g(mL)樣品中檢出或未檢出克羅諾桿菌。

7 操作步驟

7.1 樣品的稀釋

取檢樣100g(mL)、10g(mL)、1g(mL)各3份,分別置無菌容器中,分別加入900mL、90mL、9mL已預熱至41℃±1℃的BPW,用手緩緩地搖動至檢樣充分溶解,制成1:10樣品勻液,36 ℃±1℃培養18h±2h。輕輕搖動混勻培養過的前增菌液,分別移入1mL轉入10mLmLST-Vm肉湯,41.5℃±1℃培養24h±2h。

7.2 分離、鑒定

同5.2、5.3和5.4。

8 結果與報告

綜合菌落特征、確證試驗(生化鑒定)或 PCR鑒定結果,根據檢出克羅諾桿菌的陽性管數,查MPN檢索表,報告100g(mL)樣品中克羅諾桿菌的MPN值(見附錄C中表 C.1) 。