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例1 ( 2015 年全國Ⅰ卷理綜第 39 題節(jié)選) 若要測定培養(yǎng)液中微生物 B 的菌體數(shù)，可在顯微鏡下用 直接計數(shù); 若要測定其活菌數(shù)量，可選用 法進(jìn)行計數(shù)。 例2 (2019 年全國Ⅰ卷理綜第 37 題節(jié)選) Ⅱ號培養(yǎng)基加入瓊脂后可以制成固體培養(yǎng)基，若要以該固體培養(yǎng)基培養(yǎng)目標(biāo)菌并對菌落進(jìn)行計數(shù)，接種時，應(yīng)采用的方法是 。 （參考答案: 血細(xì)胞計數(shù)板 稀釋涂布平板法 稀釋涂布平板法）
解析：顯微鏡直接計數(shù)法是利用顯微鏡、血細(xì)胞計數(shù)板等工具對純培養(yǎng)懸浮液直接計數(shù)來檢測樣本中的細(xì)胞數(shù)目。該方法能直觀、快速地檢測出單細(xì)胞狀態(tài)下的微生物或絲狀微生物所產(chǎn)生的孢子的數(shù)目，但是不能區(qū)分死細(xì)胞和活細(xì)胞，不適合細(xì)胞密度低的樣品。
釋涂布平板法常常需要先將樣品進(jìn)行一系列的稀釋，然后吸取適量稀釋樣品涂布在平板上，在稀釋度適宜的情況下一個菌落是由一個活細(xì)胞繁殖形成的，從而通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)來推算活菌數(shù)。該方法能靈敏地檢測出樣品中的活菌數(shù)，但實(shí)驗(yàn)過程手續(xù)繁、耗時長、影響因素較多。 顯微鏡直接計數(shù)法由于不能區(qū)分死菌和活菌，因此計數(shù)結(jié)果往往比實(shí)際活菌數(shù)偏高。為避免把死菌計數(shù)在內(nèi)，可用臺盼藍(lán)染色: 被染成藍(lán)色的為死菌，反之為活菌。稀釋涂布平板法測定活菌數(shù)目的時候，由于相鄰兩個或多個細(xì)胞連在一起，可能形成一個菌落，因此測定值比實(shí)際值小。 例3.（2016 年全國Ⅰ卷理綜第 37 題節(jié)選）若在某次調(diào)查中，某一實(shí)驗(yàn)組平板上菌落平均數(shù)為 36 個/平板，而空白對照組的一個平板上出現(xiàn)了 6 個菌落，這種結(jié)果說明在此次調(diào)查中出現(xiàn)了 現(xiàn)象。若將30（即36-6）個/平板作為本組菌落數(shù)的平均值，該做法 ( 填“正確”或“不正確”) 。（參考答案: 污染 不正確） 設(shè)置不接種的空白培養(yǎng)基作為空白對照組，證明培養(yǎng)基制備過程中沒有被雜菌污染，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。若該培養(yǎng)基上出現(xiàn)了菌落則說明實(shí)驗(yàn)過程出現(xiàn)污染現(xiàn)象，應(yīng)舍棄數(shù)據(jù)，查找原因，重做實(shí)驗(yàn)。
例4.（浙江高考2016年10月）取適量含產(chǎn)脲酶細(xì)菌的10-4、10-5兩種土壤稀釋液，分別涂布接種到LB固體培養(yǎng)基和尿素固體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)48h，推測固體培養(yǎng)基上菌落數(shù)最少的是（ ） A.10-5稀釋液+尿素固體培養(yǎng)基 B.10-5稀釋液+LB固體培養(yǎng)基 C.10-4稀釋液+尿素固體培養(yǎng)基 D.10-4稀釋液+LB固體培養(yǎng)基 解析：在相同稀釋度下，選擇培養(yǎng)基上允許能分解尿素的菌類( 還可能有土壤中的自生固氮菌) 存活，而牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上允許土壤中幾乎所有菌類都能生存，因此若牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的菌落數(shù)比選擇培養(yǎng)基的菌落數(shù)多，則說明該培養(yǎng)基有選擇作用。答案：A
例5、( 2018 年全國Ⅰ卷理綜第 37 題節(jié)選) 甲、乙兩位同學(xué)用稀釋涂布平板法測定某一土壤樣品中微生物的數(shù)量，在同一稀釋倍數(shù)下得到以下結(jié)果:甲同學(xué)涂布了3 個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)分別是110、140 和149，取平均值133。乙同學(xué)涂布了3個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)分別是27、169 和176，取平均值124．有人認(rèn)為這兩位同學(xué)的結(jié)果中，乙同學(xué)的結(jié)果可信度低，其原因是: 。 （參考答案: 正確稀釋后涂布平板，平板上的菌落數(shù)為 30～ 300 之間，乙同學(xué)的結(jié)果中三個平板的菌落數(shù)有一個只有27）。 解析：在采用稀釋涂布平板法進(jìn)行計數(shù)時，必須設(shè)置3個稀釋度并且成梯度，每個稀釋度重復(fù)3 次以上，取平均值，避免結(jié)果的偶然性，使結(jié)果更加準(zhǔn)確可靠。 若上述乙同學(xué)的結(jié)果中三個平板的菌落數(shù)分別是30、169和176，能取三者的平均值作為實(shí)驗(yàn)結(jié)果嗎?對于數(shù)據(jù)的變異程度，最重要的度量方法是標(biāo)準(zhǔn)差。參照平板菌落數(shù)的允許差值如表1。
三個平板的菌落數(shù)分別是30、169和176，平板菌落平均數(shù)125處于101～ 300之間，標(biāo)準(zhǔn)差所允許差值為±≤50，運(yùn)用標(biāo)準(zhǔn)差公式計數(shù)，上述例題標(biāo)準(zhǔn)差為82，已經(jīng)超出允許范圍。因此，同一稀釋度的3次重復(fù)菌落數(shù)處于30 ～ 300的范圍內(nèi)時，若數(shù)據(jù)相差較大，超過允許的差值，也應(yīng)舍棄。舍棄數(shù)值30后不足三個平板，也不能用菌落數(shù)為169和176這兩個平板的平均值來推算樣品中的活菌數(shù)，而應(yīng)找出原因并重新實(shí)驗(yàn)。
