一、Western blot 技術(shù)起源

1975年，Edwin Southern發(fā)明了DNA雜交檢測技術(shù)，命名為Southern blot。1977年，James Alwine、David Kemp和George Stark發(fā)明了RNA雜交檢測技術(shù)，命名為Northern blot。兩年后位于美國斯坦福大學(xué)的George Stark發(fā)明了將蛋白從電泳凝膠上轉(zhuǎn)移到活化纖維素上的技術(shù)，隨后Harry Towbin發(fā)展出更快速、簡單的電轉(zhuǎn)技術(shù)。1981年Neal Burnette正式將這一技術(shù)命名為“Western blot”。

二、Western blot 用來干什么？

（一）確定目的蛋白的表達(dá)情況

這是Western blot最常規(guī)的應(yīng)用，如檢測患者的標(biāo)本與正常人的標(biāo)本、實(shí)驗條件處理后細(xì)胞與未處理的對照細(xì)胞之間目的蛋白的表達(dá)變化情況，通過灰度分析可以確定目的蛋白表達(dá)水平是升高還是降低。

（二）研究蛋白間的相互作用

這是與免疫共沉淀（co-immunoprecipitation，CO-IP）技術(shù)相結(jié)合的一種檢測蛋白質(zhì)之間相互作用的常用方法。通過CO-IP技術(shù)將相互作用的蛋白質(zhì)復(fù)合體分離出來后進(jìn)行凝膠電泳，然后利用相互作用的蛋白質(zhì)的特異性抗體進(jìn)行檢測。適用于對已知的蛋白質(zhì)的相互作用進(jìn)行檢測，不適用于檢測一個蛋白質(zhì)未知的相互作用蛋白；也可以用于蛋白質(zhì)-DNA、蛋白質(zhì)-RNA相互作用的后續(xù)分析。

（三）確定目的蛋白的細(xì)胞定位

通過分別提取細(xì)胞不同部位的蛋白質(zhì)，如膜蛋白、胞漿蛋白核蛋白或線粒體蛋白等，將分離出來的不同部位的蛋白質(zhì)進(jìn)行Western blot檢測可以分別檢測目的蛋白在不同部位的表達(dá)情況。

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