1.安瓿管準備

　　安瓿管材料以中性玻璃為宜。清洗安部管時，先用2%鹽酸浸泡過夜，自來水沖洗干凈后，用蒸餾水浸泡至pH中性，干后、貼上標簽，標上菌號及時間，加入脫脂棉塞后，121℃下高壓滅菌15-20分鐘，備用。

　　2.保護劑的選擇和準備

　　保護劑種類要根據微生物類別選擇。配制保護劑時，應注意其濃度及 pH值，以及滅菌方法。如血清，可用過濾滅菌;牛奶要先脫脂，用離心方法去除上層油脂，一般在100℃間歇煮沸2-3次，每次10-30分鐘，備用。

　　3.凍干樣品的準備

　　在最適宜的培養條件下將菌種培養至靜止期或成熟期，進行純度檢查后，與保護劑混合均勻，分裝。微生物培養物濃度以細胞或孢子不少于 108-1010個ml為宜(以大腸桿菌為例，為了取得每毫升1010個活細胞菌液2毫升-2.5毫升，只需10毫升瓊脂斜面兩支)。

　　4.預凍

　　般預凍2小時以上，溫度達到-20℃到-35℃左右。

　　5.冷凍干燥

　　采用冷凍干燥機進行冷凍干燥。

　　將冷凍后的樣品安部管置于冷凍干燥機的干燥箱內，開始冷凍干燥，時間一般為8-20小時。