相關驗證及日常管理
前言

濕熱滅菌是滅菌方法中比較常見和通用的一種滅菌方法，其中常用的濕熱滅菌設備就是脈動真空滅菌器。

脈動真空滅菌器其滅菌原理是通過真空泵借助水的流動抽出滅菌柜室內冷空氣，使其處于負壓狀態，然后輸入飽和純蒸氣，如此反復，在高溫和高壓力的作用下使微生物蛋白質變性凝固而滅活達到滅菌要求。滅菌后，抽真空使滅菌物品迅速干燥。具有方便、省時、省力、總滅菌時間短、滅菌徹底可靠、物品干燥等特點。

濕熱滅菌柜相關法規

1、 無菌藥品附錄第六十三條

任何滅菌工藝在投入使用前，必須采用物理檢測手段和生物指示劑，驗證其對產品或物品的適用性及所有部位達到了滅菌效果。

2、 無菌藥品附錄第六十四條

應當定期對滅菌工藝的有效性進行再驗證（每年至少一次） 。設備重大變更后，須進行再驗證。應當保存再驗證記錄。

3、 無菌藥品附錄第六十五條

應當通過驗證確認滅菌設備腔室內待滅菌產品和物品的裝載方式。

4、 無菌藥品附錄第六十七條

應當按照供應商的要求保存和使用生物指示劑，并通過陽性對照試驗確認其質量。使用生物指示劑時，應當采取嚴格管理措施，防止由此所致的微生物污染。

《中國藥典（20 版）》第四部 1421：滅菌法

滅菌工藝的驗證是無菌保證的必要條件。滅菌工藝經驗證后，方可交付正式使用。驗證內容包括：

(1)撰寫驗證方案及制定評估標準。

(2)確認設備的設計與選型。

(3)確認滅菌設 備資料齊全、安裝正確，并能正常運行。

(4)確認滅菌設備、 關鍵控制和記錄系統能在規定的參數范圍內正常運行。

(5)采 用被滅菌物品或模擬物品按預定滅菌程序進行重復試驗，確 認各關鍵工藝參數符合預定標準，確定經滅菌物品的無菌保證水平符合規定。 

(6)匯總并完善各種文件和記錄，撰寫驗證報告。滅菌工藝的日常監控:

同時應持續評估滅菌工藝的有效性及被滅菌物品的安全性和穩定性，并建立相應的變更和偏差控制程序，確保滅菌工藝持續處于受控狀態。滅菌工藝應定期進行再驗證。當滅菌設備或程序發生變更(包括滅菌物品裝載方式和數量的改變）時，應進行重新驗證。

濕熱滅菌（過度滅菌法）

對耐熱性良好的物品，一般使用過度殺滅法（the overkill method）。使用過度殺滅法的目標是確保達到一定程度的無菌保證，而不管裝載物的實際負載生物的數量多少和耐熱性如何。

濕熱滅菌（殘存概率法）

不耐熱產品/物品的滅菌使用過度殺滅法可能導致產品不可接受的降解。因此滅菌程序的確認就需研究產品的微生物數量和耐熱性。一旦確定了微生物初始數量和耐熱性，就可以設計出一個能達到P N S U為10-6的滅菌程序。

濕熱滅菌柜驗證

濕熱滅菌驗證的目的：就是通過一系列驗證試驗提供足夠的數據和文件依據，從而找到有效合理的滅菌參數， 并把已經驗證過的滅菌設備和滅菌工藝參數應用到藥品生產的除菌過程中去，以證明用于藥品生產過程中 的每一臺蒸汽滅菌設備都能起到滅菌的效果，并且對不同滅菌物品的滅菌過程和滅菌效果具有可靠性和重現性。

3Q（安裝確認、運行確認、性能確認）

安裝確認(IQ)是對供應商所供技術資料的核查， 對設備、備品備件的檢查驗收以及設備的安裝檢查，以確證其是否符合GMP、廠商的標準及企業特定技術要求的一系列活動。

運行確認(OQ)試驗系指通過按草擬的標準操作規程(SOP)進行單機或系統的運行試驗，俗稱試車。運行確認是證明設備或系統各項技術參數能否達到設定要求的一系列活動。

性能確認（PQ）

一、真空泄漏檢測

啟動檢漏程序，設備開始抽真空，當內室壓力達到限定值，平衡5分鐘，開始保壓計時，到設置的時間后（900s），如果保壓正常，打印機會自動打印“保壓結果正常”，如果有漏氣現象，泄漏限度超過設定值，則程序會中斷，出現報警，并打印“保壓結果失敗”。

二、BD測試

通過BD測試包確認滅菌腔體內去除冷空氣能力。

  注意事項：1、 確認BD包在有效期內并且性狀良好未受潮變形。2、開啟程序前可先排除管道內的冷凝水，以防止濕包。

三、空載熱分布和負載熱穿透

（1）有線溫度驗證系統

（2）空載熱分布要求：

滅菌時段內，平均溫度應≥121.0℃；最熱點和最冷點溫度之差≤2.0℃。

（3）負載熱穿透

要求：F0值＞12

布置溫度探頭和指示劑時盡可能在較為難滅菌的物品內部布點，如：硅膠軟管內部，過濾器內部，工具盒內部等）。一般來說，生物指示劑應該貼近溫度探頭放置，以便來評估生物熱致死率與基于熱輸入而預測得出的熱致死率之間的關系。當確定了難滅菌的物品后，就必須特別注意這些難滅菌物品（過濾器、填充材料、泵等）的滅菌情況。此外，還必須特別注意緊緊包裹的地方、厚厚打 包的物品、考慮安全而系得很緊的材料、非常長的管子等等。

生物指示劑以及溫度探頭的位置應該被記錄在驗證記錄中。根據驗證中的裝載形式，用來指導并應該記錄后續生產的所有批次的裝載情況。

濕熱滅菌柜驗證-后期輸出

1、驗證結果均符合要求后，會整理驗證數據出具報告并審核批準，確定最終的滅菌相關參數，裝載物品及數量；

2、將滅菌參數，裝載物品及數量輸出給車間，并配以裝載模式圖以供參考；

3、滅菌柜使用情況進行一定的跟蹤，設備有無異常，滅菌裝載是否合理和方便使用。

濕熱滅菌柜日常控制

1、每批裝載滅菌物品都會被記錄，并有相應的溫度記錄及溫度曲線；

2、每批滅菌物品放入滅菌指示帶，用以區分已滅菌物品和未滅菌物品，以防混淆；

3、每天滅菌前都會進行保壓測試，確保滅菌柜密封性；

4、設備有三級密碼，防止操作員隨意更改相關參數；

5、設備異常或維修會進行記錄，溫度控制探頭的維修或更換會對探頭進行溫度確認；

6、新增滅菌物品會進行該物品裝載驗證，驗證合格后方能正常滅菌；

7、滅菌柜每年進行周期性確認。

參考文獻

1.《藥品生產質量管理規范》2010年修訂版

2.《中國藥典》（2020版）

3.PDA Technical Report NO.1 2007

4.《藥品GMP指南.無菌藥品》2010版

5.BS EN 285:2015