1.HPLC對流動相的一般要求

流動相就比如人體的血液，其質量直接影響到整個系統的正常運行與否。

（1）應該使用HPLC級的溶劑，不能互相混溶的溶劑不可以直接切換！一般在水相和與其不混溶的溶劑切換時，使用異丙醇作為過渡溶劑。

（2）注意溶劑的截止波長。截止波長是指該溶劑可以在紫外檢測器中使用的最低波長,低于該波長后,溶劑會有很強的紫外吸收，從而影響極限的穩定性、干擾對所分析物質的檢測。

（3）HPLC所使用的水必須是新鮮的和經過0.45μm濾膜過濾過的。建議每天更換新鮮的水。長期不用時，必須把使用水的管路用有機溶劑置換，防止長霉。

（4）儀器使用完后要采用適當的溶劑沖洗等方法維護色譜柱和系統。如果使用了緩沖鹽一定先將鹽要沖洗干凈。

（5）儀器長期不用時，不建議使用純乙腈封存。因為乙腈有生成聚合物的趨勢。建議使用甲醇、甲醇/水或乙腈/水封存。

（6）當有流路堵塞時，可以嘗試將之反接后沖洗。污染的溶劑或溶劑瓶里的藻類生長將會縮短溶劑過濾器的使用壽命，并且影響泵和系統的的性能。這在水溶劑或磷酸鹽緩沖液(pH4至7)中尤其如此。

2.泵的使用要點

（1）將裝有溶劑瓶的溶劑箱放在泵上面或較高處。當在四元泵上使用鹽溶液或有機溶劑時，建議將鹽溶液接在下面的梯度閥口上，將有機溶劑接在上面的梯度閥口上，有機溶劑通道最好在水或鹽溶液通道的正上面。建議用水定期沖洗所有MCGV通道除去可能在閥口析出的鹽結晶。

（2）操作泵之前，用至少兩個體積（標準脫氣機30mL，對微脫氣機10mL）沖洗真空脫氣機,特別是當泵關閉了一段時間后(例如，過夜)，以及在通道中使用揮發性混合溶劑時，防止溶劑瓶內的玻璃濾頭(過濾器)堵塞及長菌，當濾頭表面有黑色或黃色污染層說明發生了堵塞，應立即清洗或更換。

（3）定期檢查排液閥的過濾白頭。檢查方法：擰開排液閥，以水作流動相。    

（4）對于標準脫氣機(G1322A)來說,流速為5mL/min水，若壓力大于10bar，則建議更換。 

（5）對于微量脫氣機(G1379A)來說,流速為2mL/min水，若壓力大于5bar，則建議更換。

（6）當使用低流速時，檢查所有1/16英寸接頭有無滲漏（用壓力測試或漏液測試。每當更換泵密封墊時排液閥慮芯也應更換。

（7）更換活塞密封墊時檢查活塞桿上是否有劃痕。有劃痕的活塞將導致輕度滲漏，并降低密封墊的使用壽命。應盡早更換有劃痕的活塞。

（8）使用緩沖溶液時，關泵前先用水沖洗系統。當需要長時間使用0.1摩爾或更高濃度的緩沖液時，最好選用密封墊清洗附件，以減少對密封墊及活塞桿的磨損。

（9）如果使用了高濃度的緩沖鹽，可以考慮用熱水（50－60℃）來沖洗鹽通道來確保沒有緩沖鹽殘留在系統中。

（10）更換活塞密封墊后應按照密封墊安裝步驟對其進行磨合，但磨合不適用于正相密封墊。

（11）當泵頭安裝有柱塞清洗附件時，由于該附件中也有密封墊，這樣就會增加活塞桿運動時的阻力。所以開泵前一定要用10％異丙醇，并將其流速調至約2－3滴/分鐘使溶液流過沖洗裝置。(對于二元泵SL，如果不使用鹽溶液可以不開)10％異丙醇有助于降低水的表面張力，并有抑菌作用。不要用其它溶劑代替。

當泵頭安裝有沖洗附件而不開啟10％異丙醇，會使密封墊及活塞桿的壽命減短(二元泵SL除外)，泵頭如果發出“吱吱”聲不影響使用和泵的精度如果有必要，可以改變壓縮因子（compressibility）來達到更好的效果。

3. 自動進樣器

（1）樣品在進樣前必須經過適當的預先處理，需要經過亞微米濾膜的過濾或者離心，防止樣品中的微小顆粒堵塞管路，最好使用流動相作為溶劑配制樣品，所用溶劑應該對樣品有較好的溶解性。

（2）針座是喇叭口朝上暴露在空氣中的，有時空氣中的較大灰塵顆粒可能恰好落在針座的流路內而引起針座的堵塞。這時候可以嘗試卸下針座，將它接在泵的出口上反沖，一般能解決問題。

（3）如果經常使用緩沖溶液，除了泵頭之外，ALS計量泵的柱塞及密封圈，六通閥的轉子密封圈和定子密封圈應該定期清洗，防止有鹽的顆粒磨損ALS一定要使用Agilent的樣品瓶及瓶蓋；使用不兼容的或者加工精度差的樣品瓶及瓶蓋會引起ALS故障率的增加及性能的降低。

4. DAD常見故障及維護

（1）故障

（2）HPLC日常維護

（3） HPLC常見故障診斷