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一. 影響顯色反應(yīng)的因素及反應(yīng)條件的選擇
(20)
(21)
（一）顯色反應(yīng)的選擇
1. 選擇性好：干擾少或易排除；
2. 靈敏度高（S）：尤其是對(duì)低含量組分，一般選擇 e：104 ~ 105 L/mol·cm
3. 有色化合物穩(wěn)定、組成恒定
4. 有色化合物與顯色劑的顏色差別大
（二）影響顯色反應(yīng)的因素及反應(yīng)條件
1. 顯色劑的用量
M + R ⇌ MR
待測(cè)組分 顯色劑 有色化合物
在被測(cè)組分一定及其它實(shí)驗(yàn)條件不變的情況下，分別測(cè)得加入不同量顯色劑測(cè)得A值，作A-cR曲線，常見以下二種情況：圖7 吸光度與顯色劑加入量的關(guān)系
(a)
在 a 與 b之間任選一點(diǎn)
吸光度與顯色劑加入量的關(guān)系
(b)
嚴(yán)格控制CR
因此，合適的 cR 通過實(shí)驗(yàn)確定。2. 溶液的酸度
(1) 對(duì)金屬離子存在狀態(tài)的影響——防止水解，防止沉淀生成
(2) 對(duì)顯色劑濃度的影響 H2R ⇌ 2H+ + R2-
(3) 對(duì)顯色劑顏色的影響
pKa pKa
H2R ⇌ H+ + HR- ⇌ 2H+ + R2-
6.9 12.4
黃 橙 紅適宜的 pH 通過實(shí)驗(yàn)確定：做 A- pH 曲線（其它條件并不變），從中找出 A 較大且基本不變的某 pH 范圍。
3. 顯色時(shí)間：各種顯色反應(yīng)得速度不同，反應(yīng)完全所需時(shí)間不同；有些有色化合物在一定的時(shí)間內(nèi)穩(wěn)定。
選擇方法：作 A-t（min） 曲線，選擇在 A 較大且穩(wěn)定的時(shí)間內(nèi)進(jìn)行。
4. 顯色溫度：顯色反應(yīng)一般在室溫下進(jìn)行，但反應(yīng)速度太慢或常溫下不易進(jìn)行的顯色反應(yīng)需要升溫或降溫。
選擇方法：作 A-T （℃）曲線，選擇在 A 較大的時(shí)間內(nèi)進(jìn)行。
5. 溶劑：實(shí)驗(yàn)確定——選擇合適的溶劑（常為有機(jī)溶劑），提高反應(yīng)的靈敏度及加快反應(yīng)速度。
二. 分光光度法測(cè)量誤差及實(shí)驗(yàn)條件的選擇
（一）測(cè)量誤差及 A 范圍的選擇
任何一臺(tái)分光光度計(jì)都有光度誤差 ∆T%，但給定的一臺(tái)分光光度計(jì)， ∆T 基本上是一常數(shù)，一般為 ±0.002 ~ ± 0.01，但在不同 T 時(shí)同樣的 ∆T 對(duì)應(yīng)的 ∆A 則不同，所以引起的∆C/C (濃度的相對(duì)誤差)就不同。
由 L-B 定律得：
(20)
將此式微分得：
濃度相對(duì)誤差為：
(21)
設(shè) 當(dāng) ∆T = ± 0.01時(shí) ，不同 T% 時(shí)所對(duì)應(yīng)的 ∆c/c 可從相關(guān)表查得：
當(dāng) T% = 36.8% 即 A = 0.434時(shí)， ∆c/c 最小；
當(dāng) T% 在 15-65% 之間 即 A 在0.2 ~ 0.8范圍內(nèi)，∆c/c 較小。
實(shí)際測(cè)定時(shí)：可通過控制溶液的 c 及 b 使 A 在 0.2 ~ 0.8 范圍內(nèi)。
（二）測(cè)量波長(zhǎng)選擇
一般根據(jù)吸收光譜選擇 lmax 測(cè)定——靈敏度高、A 隨波長(zhǎng)變化小若有干擾，根據(jù)“吸收大，干擾小”原則選擇l 。
如：3，3’-二氨基聯(lián)苯（DAB）和 Se 形成配合物 Se-DAB 的最大吸收波長(zhǎng)在340nm波長(zhǎng)處，DAB也有很強(qiáng)的吸收，在這種情況下，分析波長(zhǎng)應(yīng)選用次大吸收波長(zhǎng)420nm，否則測(cè)量誤差較大。
3. 狹縫寬度
理論上，定性分析采用最小的狹縫寬度，在定量分析中，為避免狹縫太小，出射光太弱而引起信噪比降低，可以將狹縫開大一點(diǎn)。通過測(cè)定 A 隨狹縫寬度的變化規(guī)律，可選擇出合適的狹縫寬度。狹縫寬度在某個(gè)范圍內(nèi)，A 值恒定，狹縫寬度增大至一定程度時(shí) A 減小，因此：合適的狹縫寬度是 在 吸光度不減小時(shí)的最大狹縫寬度。
（三）空白溶液的選擇
空白溶液是用來調(diào)節(jié)工作零點(diǎn) 即 A=0，T%=100% 的溶液，以消除溶液中其它基體組分以及吸收池和溶劑對(duì)入射光的反射和吸收所帶來的誤差。
根據(jù)情況不同，常用空白溶液有如下選擇：
1. 溶劑空白：當(dāng)溶液中只有待測(cè)組分在測(cè)定波長(zhǎng)下有吸收，而其它組分無吸收時(shí)
— 用純?nèi)軇┳骺瞻祝?/span>
2. 試劑空白：如果顯色劑或其它試劑有吸收，而待測(cè)試樣溶液無吸收
— 則用不加待測(cè)組分的其它試劑作空白；
3. 試樣空白：如果試樣基體有吸收，而顯色劑或其它試劑無吸收
— 則用不加顯色劑的試樣溶液作空白；
4. 平行操作空白：用溶劑代替試樣溶液，以與試樣完全相同的分析步驟進(jìn)行平行操作，用所得的溶液作空白。
