一、實(shí)驗(yàn)室基本要求

1.檢驗(yàn)人員微生物檢驗(yàn)應(yīng)由具有相應(yīng)的微生物專(zhuān)業(yè)教育或培訓(xùn)經(jīng)歷，掌握包括常規(guī)微生物檢測(cè)、無(wú)菌操作、消毒知識(shí)、生物防護(hù)等相關(guān)知識(shí)和專(zhuān)業(yè)技能，并具備相應(yīng)檢驗(yàn)資質(zhì)的人員實(shí)施檢驗(yàn)。
　　2.環(huán)境與設(shè)施
　　食品微生物檢驗(yàn)應(yīng)在潔凈區(qū)域進(jìn)行。潔凈區(qū)域的級(jí)別應(yīng)按照GB 50687《食品工業(yè)潔凈用房建筑技術(shù)規(guī)范》中“附錄A食品生產(chǎn)良好衛(wèi)生生產(chǎn)環(huán)境”中規(guī)定的“Ⅱ級(jí)背景下的Ⅰ級(jí)”，即傳統(tǒng)意義上10000級(jí)背景下的100級(jí)。病原微生物的分離鑒定工作應(yīng)在二級(jí)或以上生物安全實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，生物安全實(shí)驗(yàn)室應(yīng)按照GB 50346《生物安全實(shí)驗(yàn)室建設(shè)技術(shù)規(guī)范》設(shè)計(jì)和施建，并符合《中華人民共和國(guó)生物安全法》(草案)、GB 19489《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》等，以保證人員與環(huán)境的生物安全。
　　3.實(shí)驗(yàn)設(shè)備
　　實(shí)驗(yàn)室應(yīng)配備滿足檢測(cè)工作要求的儀器設(shè)備，如天平、培養(yǎng)箱、水浴鍋、冰箱、均質(zhì)器、顯微鏡、生物安全柜等。其中培養(yǎng)箱的配置應(yīng)考慮到用途、控溫范圍、控制精度和數(shù)量的要求。對(duì)結(jié)果有重要影響的儀器的關(guān)鍵量或值，如培養(yǎng)箱溫度及其均勻性和穩(wěn)定性等指標(biāo)，應(yīng)納入設(shè)備的校準(zhǔn)/檢定計(jì)劃，并保證校準(zhǔn)/檢定設(shè)備的修正因子/誤差得到及時(shí)更新和正確使用。
　　4.檢驗(yàn)用品
　　無(wú)菌采樣容器、試管、平皿、錐形瓶等在使用前應(yīng)保持清潔和/或無(wú)菌。無(wú)菌工器具和器皿應(yīng)有明顯標(biāo)識(shí)以與非無(wú)菌工器具和器皿加以區(qū)別。
　　5.培養(yǎng)基和試劑
　　培養(yǎng)基和試劑的制備和質(zhì)量要求按照GB 4789.28的規(guī)定執(zhí)行。
　　6.質(zhì)控菌株
　　實(shí)驗(yàn)室必須保存有滿足試驗(yàn)需要的標(biāo)準(zhǔn)菌種/菌株，除檢測(cè)方法中規(guī)定的菌種外，還應(yīng)包括應(yīng)用于培養(yǎng)基（試劑）驗(yàn)收/質(zhì)量控制、方法確認(rèn)/證實(shí)、陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照、人員培訓(xùn)考核和結(jié)果質(zhì)量的保證等所需的菌株。標(biāo)準(zhǔn)菌株應(yīng)可溯源至微生物菌種保藏專(zhuān)門(mén)機(jī)構(gòu)或?qū)�業(yè)權(quán)威機(jī)構(gòu)。

二、樣品的采集
　　1.采樣原則
　　采樣是食品檢驗(yàn)過(guò)程中首要而且極其重要的環(huán)節(jié)，其對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的有效性有著直接影響。因微生物分布的不均勻性，采樣應(yīng)遵循隨機(jī)性和代表性原則，過(guò)程遵循無(wú)菌操作程序,防止一切可能的外來(lái)污染。
　　2采樣方案
　　根據(jù)檢驗(yàn)?zāi)康摹⑹称诽攸c(diǎn)、批量、檢驗(yàn)方法、微生物的危害程度等確定采樣方案。采樣方案分為二級(jí)和三級(jí)采樣方案。二級(jí)采樣方案設(shè)有n（同一批次產(chǎn)品應(yīng)采集的樣品件數(shù)）、c（最大可允許超出m值的樣品數(shù)）和m值［微生物指標(biāo)可接受水平限量值（三級(jí)采樣方案）或最高安全限量值（二級(jí)采樣方案）］，三級(jí)采樣方案在二級(jí)采樣方案的基礎(chǔ)上設(shè)有M值（微生物指標(biāo)的最高安全限量值）。
　　對(duì)于沙門(mén)氏菌、單核細(xì)胞增生李斯特氏菌、大腸埃希氏菌O157:H7等危害程度高的微生物，GB 29921《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中致病菌限量》規(guī)定均為二級(jí)采樣方案：n=5，c=0，m=0。對(duì)于金黃色葡萄球菌和副溶血性弧菌危害程度較低的微生物，GB 29921規(guī)定均為三級(jí)采樣方案，如水產(chǎn)制品中金黃色葡萄球菌和副溶血性弧菌限量標(biāo)準(zhǔn)均為：n=5，c=1，m= 100CFU/g，M=1000 CFU/g，含義是從一批產(chǎn)品中采集5個(gè)樣品，若5個(gè)樣品的檢驗(yàn)結(jié)果均小于或等于m值(≤100CFU/g)，則這種情況是允許的；若≤1個(gè)樣品的結(jié)果(X)位于m值和M值之間(100 CFU/g  
　　3.采集樣品的貯存和運(yùn)輸
　　采樣后應(yīng)在接近原有貯存溫度條件下貯存樣品，或采取必要措施防止樣品中微生物數(shù)量的變化，盡快將樣品送往實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)，并在運(yùn)輸過(guò)程中保持樣品完整。

三、檢驗(yàn)
　　1.樣品處理
　　實(shí)驗(yàn)室接到送檢樣品后認(rèn)真核對(duì)登記，并按要求盡快檢驗(yàn)，若不能及時(shí)檢驗(yàn)，應(yīng)采取必要的措施，防止樣品中原有微生物因客觀條件的干擾而發(fā)生變化。各類(lèi)食品樣品處理應(yīng)按相關(guān)食品安全標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法的規(guī)定執(zhí)行，GB 4789系列（17-25）共有包括肉與肉制品、乳與乳制品、蛋與蛋制品等9個(gè)食品類(lèi)別的樣品處理方法。
　　2.樣品檢驗(yàn)
　　按食品安全相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定進(jìn)行檢驗(yàn)，一般食品中微生物指標(biāo)都采用GB 4789系列進(jìn)行采樣、前處理和檢驗(yàn)。但也有些產(chǎn)品類(lèi)別在相應(yīng)食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中有明確要求，如GB 8537《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)飲用天然礦泉水》、GB 14963《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)蜂蜜》中的嗜滲酵母計(jì)數(shù)、GB 14934《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)消毒餐（飲）具》等，如GB 17400《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方便面》微生物限量明確適用于面餅和調(diào)料的混合檢驗(yàn)。
　　3.過(guò)程質(zhì)量控制
　　實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)需要設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照和空白對(duì)照,定期對(duì)檢驗(yàn)過(guò)程進(jìn)行質(zhì)量控制。同時(shí)也應(yīng)定期對(duì)實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)行技術(shù)考核，加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室各要素風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估和過(guò)程質(zhì)量控制。

四、記錄與報(bào)告
　　實(shí)驗(yàn)室應(yīng)按照檢驗(yàn)方法中規(guī)定的要求，準(zhǔn)確、客觀、及時(shí)記錄實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象并報(bào)告檢驗(yàn)結(jié)果。日常抽檢微生物原始記錄也有相應(yīng)的信息要求，如應(yīng)包含樣品編號(hào)、檢驗(yàn)時(shí)間、檢測(cè)地點(diǎn)、檢測(cè)項(xiàng)目、檢測(cè)依據(jù)、檢測(cè)關(guān)鍵設(shè)備名稱和編號(hào)、關(guān)鍵培養(yǎng)基名稱（追溯至具體品牌、批號(hào)及配制記錄）、關(guān)鍵試劑信息、檢驗(yàn)過(guò)程中使用的標(biāo)準(zhǔn)菌株信息、樣品具體取樣量及所使用稀釋液名稱、培養(yǎng)箱溫度及培養(yǎng)時(shí)間、詳細(xì)結(jié)果記錄、空白、陰性和陽(yáng)性對(duì)照結(jié)果記錄等信息。

五、檢驗(yàn)后樣品的處理
　　檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)告后,被檢樣品方能處理。檢出致病菌的樣品要經(jīng)過(guò)無(wú)害化處理。鑒于微生物分布的不均勻性和動(dòng)態(tài)變化性，國(guó)際食品法典委員會(huì)頒布的《食品微生物標(biāo)準(zhǔn)的制定和應(yīng)用原則》規(guī)定，不合格批次不得通過(guò)復(fù)檢否定初次檢驗(yàn)的結(jié)果。同理，GB 4789.1規(guī)定“檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)告后，剩余樣品和同批產(chǎn)品不進(jìn)行微生物項(xiàng)目的復(fù)檢”，《食品安全抽樣檢驗(yàn)管理辦法》（總局15號(hào)令）也明確規(guī)定“檢驗(yàn)結(jié)論為微生物指標(biāo)不合格的食品不予復(fù)檢”。

□崔學(xué)文 余曉琴
四川省食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)院