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常見問題匯總
01
VRBA培養相關問題 1）所用器皿是否需要滅菌？ 不需要。配制培養基所用到的錐形瓶、玻璃棒、勺子等均不需要滅菌。但必須清洗干凈，表面無污漬、無殘留。煮沸完成后，取下錐形瓶，用一般常用的軟紙覆蓋瓶口，并橡皮筋纏繞，待冷卻至適宜溫度后，即可傾注培養基。在傾注培養基時，須點燃酒精燈，稍微灼燒錐形瓶口。 2）如何保持“煮沸2min”？ 可以用電磁爐或者電熱板進行加熱煮沸，在該培養基即將煮沸時調低溫度。實際操作時，不需要嚴格按照此要求進行，加熱煮沸數秒即可。因為本培養基很難保持煮沸2min，一旦煮沸，則培養基很快上涌、翻騰，若不調低問題或及時采取其它措施，則培養基很有可能在數秒內噴涌出來，嚴重者可噴涌2米以上、電磁爐周圍1-2米范圍內都是培養基飛濺的范圍。 3）若培養基未用完，是否可以冷藏起來下次用？ 不可以。4789.28中已規定，固體培養基最多允許熔融一次，并且特指經過高壓霉菌冷卻后的培養基還可以熔融一次后使用。且VRBA培養基冷卻后，再次熔融后非常容易噴涌，若溫度控制不當，底部培養基熔融后很快就會發生噴涌，即培養基未完全熔融就會發生噴涌現象。 4）傾注完成后是否需要“覆蓋一層"?如何覆蓋？ 一般情況下不需要覆蓋。在實際操作過程中，若檢驗員初次接觸該樣品類別，則因為不確定是否會發生菌落蔓延，所以有必要在傾注培養基的時候再覆蓋一層，但如此反復多次測試后，若樣品中不存在菌落蔓延情況，則以后的檢驗中都不需要進行覆蓋。若重復多次測試后都有蔓延情況，則以后的檢驗中都需要覆蓋，應該在原培養基已凝固或半凝固時再傾注一層培養基。 02
如何確定培養基上長得是不是大腸菌群？
03
兩個梯度都漲了菌，如何選取？
若兩個連續梯度的4個平板上都要挑取菌落進行證實實驗，實際操作時，可靈活操作，如1:10的兩個平板上的菌落數分別為120、123，1:100的兩個平板的菌落數分別為16,18，嚴格來講必須至少在每個平板上分別挑取10個可疑菌落和10個典型菌落進行證實實驗，如此需要40根GBLB肉湯管。建議使用鎳合金接種環，以為VRBA上生長的菌落大部分在底層、且菌落一般比較大，被培養基覆蓋，傳統的接種環較細，用以刮去上層培養基比較方便，挑取菌落也比較方便。
04 如何進行證實實驗，菌落選取數量？
建議新手們VRBA上的所有不同形態的菌落都進行證實實驗。每種不同形態都挑取5-10個進行證實實驗（BGLB管足夠，建議多挑選幾個進行實驗）。
05
結果如何計算？ 首先，在VRBA培養24h后進行計數，分別計數可疑大腸菌群和典型大腸菌群的數量。假如在1:10的平板上的可疑大腸菌群有10個，典型大腸菌群有6個；然后進行證實實驗，假如10個可疑大腸菌群中有3個證實為陽性，6個典型大腸菌群中有5個證實為陽性，則計算方法如下：最終大腸菌群數=經證實的大腸菌群數=可疑大腸菌群經證實的數量+典型大腸菌群經證實的數量=10×（3／10）×10+6×（5／6）×10＝80。 06
若平板上有很多菌落，最終證實全部為陰性，結果如何計算？
建議新手們認真按照標準進行證實實驗，此證實實驗操作簡單，每一次VRBA上有菌落生長都進行證實實驗，如此往復3-4次，對于哪種形態才是大腸菌群均可了然于心。
選取15-150CFU之間的平板，挑選可疑菌落進行證實實驗。舉例如下：
注意：A. 每種可疑菌落挑取5個，每個菌落放入1根GBLB管中；B. “產氣者，記為大腸菌群陽性管‘’，就要求在實驗前必須認真篩選BGLB管，凡產氣的GBLB管應棄去不用。
選取適宜菌落數的平板挑取菌落進行證實試驗，若證實全部為陰性，則需要再挑取更低稀釋度的平板上的菌落，建議可疑和典型菌落分別挑取10個進行驗證試驗，若第二次證實實驗均呈陰性，以＜1乘以最低稀釋度進行計算。
