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蛋白濃度測(cè)定的方法有很多，但每種方法都有其特點(diǎn)和局限性，因而需要在了解各種方法的基礎(chǔ)上根據(jù)不同情況選用恰當(dāng)?shù)姆椒ǎ詽M足不同的要求。例如凱氏定氮法結(jié)果精確，但操作復(fù)雜，用于大批量樣品的測(cè)試則不太合適；Lowry法精確度較高，但是比較費(fèi)時(shí)，且每步的時(shí)間要求相對(duì)嚴(yán)格；Bradford法靈敏簡(jiǎn)便，但易受去垢劑的影響；BCA法以其試劑穩(wěn)定，抗干擾能力強(qiáng)，結(jié)果穩(wěn)定，靈敏度高而受歡迎。
2. BCA法：
原理：在堿性環(huán)境下，蛋白質(zhì)將銅離子還原成亞銅離子，二喹啉甲酸（BCA）與亞銅離子形成紫色的絡(luò)合物，這種絡(luò)合物溶于水并在562nm處產(chǎn)生光吸收峰值，光吸收強(qiáng)度在一定范圍內(nèi)與蛋白質(zhì)含量呈近似線性關(guān)系，因此使用比色法可以對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)和定量。BCA法沒(méi)有反應(yīng)終點(diǎn)，反應(yīng)會(huì)隨著時(shí)間而持續(xù)進(jìn)行；通過(guò)一段時(shí)間的孵育后，反應(yīng)速度會(huì)變慢，從而可以對(duì)大量樣品進(jìn)行檢測(cè)。
優(yōu)點(diǎn)：
1. 靈敏度高，可以檢測(cè)到低至0.5μg/mL的蛋白質(zhì)。
2. 對(duì)蛋白質(zhì)分子量沒(méi)有要求，小分子量肽也可檢測(cè)。
3. 結(jié)果穩(wěn)定可靠，重復(fù)性好。
4. 可用于高通量的蛋白質(zhì)測(cè)定。
5. 與Bradford法相比，可耐受一定濃度的去垢劑。
缺點(diǎn)：
1. 受螯合劑和略高濃度的還原劑的影響：EDTA小于10mM，DTT和巰基乙醇均低于1mM。
2. 對(duì)不同蛋白質(zhì)的反應(yīng)性不同，因此不同蛋白質(zhì)靈敏度有差異。
3. 與Bradford法相比，操作相對(duì)較復(fù)雜，需要多個(gè)步驟。
