一、概要
    克倫特羅（Clenbuterol）屬于β-興奮劑，因?yàn)樵撍幙梢蕴岣呤萑饴剩瑴p少脂肪沉積和促進(jìn)動(dòng)物生長，被一些畜牧養(yǎng)殖企業(yè)作為養(yǎng)殖促進(jìn)劑非法使用。人食用了飼喂克倫特羅作為添加劑的動(dòng)物所產(chǎn)生的畜產(chǎn)品后，殘留的克倫特羅可導(dǎo)致人體肌肉震顫、心悸、神經(jīng)過敏、頭痛、目眩、惡心、嘔吐、發(fā)燒、戰(zhàn)栗等癥狀，對(duì)消費(fèi)者的健康造成極大危害。因此世界許多國家現(xiàn)已被明令禁止在飼料中添加克倫特羅來增加動(dòng)物的瘦肉率。HPLC或GC-MS一直用作檢測(cè)β興奮劑的方法，但是其前處理步驟費(fèi)用昂貴；而使用酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒方法則可以經(jīng)濟(jì)、快速地檢測(cè)尿，血清，肌肉，肝臟及飼料中的CLE。
   鹽酸克倫特羅檢測(cè)試劑盒是應(yīng)用ELISA技術(shù)研發(fā)而成的檢測(cè)產(chǎn)品，操作時(shí)間短于45min，能最大限度地減少操作誤差和工作強(qiáng)度。

二、試驗(yàn)原理
 鹽酸克倫特羅檢測(cè)試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在酶標(biāo)板微孔條上預(yù)包被克倫特羅抗原，樣本殘留的克倫特羅和微孔條上預(yù)包被的抗原競爭抗克倫特羅抗體，加入酶標(biāo)二抗后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其殘留物克倫特羅負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較再乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)，即可得出樣品中克倫特羅的含量。

三、適用范圍
 鹽酸克倫特羅檢測(cè)試劑盒可定性、定量檢測(cè)動(dòng)物組織、飼料、尿液、血清等樣本中克倫特羅的殘留量。

四、交叉反應(yīng)率
克倫特羅 ………………………………………………100%
特普他林 ……………………………………………小于1%
非諾特羅 ……………………………………………小于1%
馬布特羅 ……………………………………………小于1%
西馬特羅 …………………………………………小于1%
溴布特羅 ……………………………………………小于1%
塞曼特羅 ……………………………………………小于1%

五、操作步驟
 1、將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，置于室溫（20～25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
 2、取出需要數(shù)量的微孔板，將不用的微孔放入自封袋，保存于2～8℃。
 3、洗滌工作液在使用前也需回溫。
 4、編號(hào)：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
 5、加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本：加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本20l/孔到對(duì)應(yīng)的微孔中，再加入克倫特羅酶標(biāo)物50l/孔，再加入克倫特羅抗試劑80ul/孔輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環(huán)境中反30min
 6、洗板：小心揭開蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，用洗滌工作液300l/孔，充分洗滌5次，每次間隔30s，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破）。
 7、顯色：加入底物液A液50l/孔，再加底物液B液50l/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環(huán)境中反應(yīng)15～20min。
 8、測(cè)定：加入終止液50l/孔，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測(cè)，請(qǐng)?jiān)?min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)），測(cè)定每孔OD值。(若無酶標(biāo)儀，則不加終止液用目測(cè)法可進(jìn)行判定)。

六、檢測(cè)方法靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度
試劑盒靈敏度：0.1ppb
樣本最低檢測(cè)限：
組織樣品………………………………………0.3ppb
尿液或血清樣品………………………………0.1ppb
飼料樣品……………………………………5ppb
回收率：
組織樣品………………………………………80±10%
尿液或血清樣品………………………………80±10%
飼料樣品…………………………………80±10%
精密度：試劑盒的變異系數(shù)均小于10%

七、注意事項(xiàng)
1、室溫低于20℃或試劑及樣本沒有回到室溫（20～25℃）會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
2、在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會(huì)出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
3、每加一種試劑前需將其搖勻。
4、反應(yīng)終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
5、不要使用過了有效日期的試劑盒；也不要使用過了有效期的試劑盒中的任何試劑，摻雜使用過了有效期的試劑盒會(huì)引起靈敏度的降低；不要交換使用不同批號(hào)試劑盒中的試劑。
6、儲(chǔ)存條件：保存試劑盒于2～8℃，不要冷凍，將不用的酶標(biāo)板微孔板放進(jìn)自封袋重新密封。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對(duì)光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
7、試劑變質(zhì)的跡象發(fā)色試劑有任何顏色表明發(fā)色劑變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）時(shí)，表示試劑可能變質(zhì)。
8、在加入底物液A液和底物液B液后，一般顯色時(shí)間為15～20min即可。若顏色較淺，可延長反應(yīng)時(shí)間到30min（或更長），但不得超過40min。反之，則減短反應(yīng)時(shí)間。
9、該試劑盒最佳反應(yīng)溫度為25℃，溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測(cè)吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

八、貯藏條件及保存期
貯藏條件：保存試劑盒于2~8℃。
保存期：該產(chǎn)品有效期為12個(gè)月。