原理

間接炭凝集反應(yīng)簡稱炭凝。它是以炭粉微粒作為載體，將已知的抗體球蛋白吸附于這種載體上，形成炭粉抗體復(fù)合物，當(dāng)炭血清與相應(yīng)的抗原相遇時(shí)，二者發(fā)生特異性結(jié)合，形成肉眼可見的炭微粒凝集塊。

目前炭凝反應(yīng)已用于炭疽、鼠疫和馬副傷寒性流產(chǎn)等病的診斷。

材料與試劑

1．炭粉 炭粉粒子最好大小在0.12mm～0.15mm，目前市場上出售的炭粉均不合要求，必須過300目／寸的標(biāo)準(zhǔn)篩以300r／min離心去沉淀，再以3 000r／min離心去上清，收集沉淀物。

2．高免血清

3．待測標(biāo)本

4．滅活兔血清

5．正常血清

6．標(biāo)準(zhǔn)抗原

7．0.05mol/L pH7.2PBS液

8．1％硼酸的PBS液

操作方法

1．炭致敏 取濕炭粉0.25g（干粉0.10g），加入經(jīng)56℃～60℃滅活30min的稀釋高免血清3ml，充分搖勻，置37℃致敏30min，不時(shí)搖動(dòng)，取出后用pH 7.2 PBS液洗滌3次。最后一次用含1％硼酸和1％兔血清的PBS液洗滌一次，離心去上清，再取此液3ml，混勻即可。同時(shí)以正常血清致敏的炭粒處理，以作對(duì)照。

致敏血清（加1/萬硫柳汞防腐）于室溫或4℃冰箱中保存，一年內(nèi)有效。

2．取潔凈玻璃板一塊，以玻璃鉛筆劃成小格，加被檢標(biāo)本0.10ml，再加免疫炭血清0.05ml，充分混勻，靜止1min~5min，判定結(jié)果。同時(shí)設(shè)三個(gè)對(duì)照：

⑴免疫炭血清 標(biāo)準(zhǔn)抗原。

⑵正常炭血清 標(biāo)準(zhǔn)抗原。

⑶正常炭血清加待檢抗原。

結(jié)果判定

在對(duì)照完全成立的情況下，判定本試驗(yàn)結(jié)果：

“＋＋＋＋”：炭粉全部凝集，液體完全清亮透明。

“＋＋＋” ：炭粉大部分凝集，液體透明。

“＋＋” ：炭粉一半凝集，液體較透明。

“＋” ：炭粉微凝集，但與對(duì)照有差別，液體混濁。

“—” ：炭粉不凝集，液體不透明。

炭凝以“＋＋”做為反應(yīng)滴度的終點(diǎn)。