1

支原體是一類缺乏細胞壁的原核細胞型微生物，大小一般在0.3-0.5um之間，呈高度多形性，有球形、桿形、絲狀、分枝狀等多種形態(tài)。它不同于細胞，也不同于病毒。支原體用普通染色法不易著色，用姬姆薩染色很淺，革蘭染色為陰性。支原體可在雞胚絨毛尿囊膜上或細胞培養(yǎng)中生長，營養(yǎng)要求比細菌高。
細胞培養(yǎng)（特別是傳代細胞）被支原體污染是個世界性問題。在細胞培養(yǎng)中支原體感染發(fā)生率達到63%，支原體感染發(fā)生后能改變細胞的DNA,RNA及蛋白表達，又不能通過可視法對其進行檢測，而且它對細胞的生長率影響較小，不易引起注意。國內外研究表明，95％以上是以下四種支原體：口腔支原體（M.orale）、精氨酸支原體（M.arginini）、豬鼻支原體（M.hyorhinis）和萊氏無膽甾原體（A.laidlawii），為牛源性。以上是最常見的污染細胞培養(yǎng)的支原體菌群，但能夠污染細胞的支原體種類是很多的，國外調查證明，大約有二十多種支原體能污染細胞，有的細胞株可以同時污染兩種以上的支原體。
支原體污染的來源包括工作環(huán)境的污染、操作者本身的污染（一些支原體在人體是正常菌群）、培養(yǎng)基的污染、污染支原體的細胞造成的交叉污染、實驗器材帶來的污染和用來制備細胞的原始組織或器官的污染。
組織細胞培養(yǎng)工作中，主要從以下幾個方面來預防支原體的污染：控制環(huán)境污染；嚴格實驗操作；細胞培養(yǎng)基和器材要保證無菌；在細胞培養(yǎng)基中加入適量的抗生素。支原體污染細胞后，特別是重要的細胞株，有必要清除支原體，常用方法有抗生素處理、抗血清處理、抗生素加抗血清和補體聯(lián)合處理。支原體最突出的結構特征是沒有細胞壁，一般來講，對作用于細胞壁生物合成的抗生素，如 -內酰胺類、萬古霉素等完全不敏感；對多粘菌素（polymycin）、利福平、磺胺藥物普遍耐藥。對支原體最有抑制活性及常用于支原體感染治療的抗生素是四環(huán)素類、大環(huán)內酯類及一些氟喹諾酮；其他類抗生素如氨基糖苷類、氯霉素對支原體有較小抑制作用，所以常不用來作為支原體感染的化學治療劑。InvivoGen公司研究開發(fā)的新一代支原體抗生素M-Plasmocin能有效地殺滅支原體，不影響細胞本身的代謝，并且用M-Plasmocin處理過的培養(yǎng)細胞，不會重新感染支原體。
紅霉素有效，而且不影響細胞生長。我的細胞剛開始被支原體污染，細胞生長極為緩慢，而且狀態(tài)不好，細胞之間及底部總有一些亮晶晶的顆粒狀物質，換液后好些，但過2天又會增多，培養(yǎng)液清亮，嚴重時象一層細沙鋪在瓶底。剛開始以為是消化過頭引起的細胞的碎片和細胞內的顆粒，后來發(fā)現(xiàn)與胰酶消化無關。使用紅霉素（就在醫(yī)院的門診購買，很便宜）后這種現(xiàn)象明顯好轉，背景干凈，細胞生長很快，狀態(tài)明顯好轉，但好像紅霉素不能完全根治支原體感染，停藥后一段時間可以復發(fā)，熱滅活可以試試，41度10個小時，可以殺死支原體，是一種比較簡單的方法，對細胞損傷不大。

2

支原體是細胞培養(yǎng)中最常見的，干擾實驗結果的一種污染。但由于不易被察覺，有些污染的細胞仍在繼續(xù)使用。據(jù)查，目前各實驗室使用的二倍體細胞和傳代細胞中約有11%的細胞受到支原體污染。因此，對支原體污染應嚴加防范。
用卡那霉素預防支原體污染有效。
檢測方法：
1 相差顯微鏡檢測；2 低張?zhí)幚淼匾录t染色觀察； 3 DNA熒光染色法；4 電鏡檢測；5 3-H胸腺嘧啶摻入法； 6 聚合酶鏈反映法； 7 免疫學方法； 8 支原體的培養(yǎng)。

3

對于支原體污染的細胞，可以采取補救措施：
1 抗生素排除法：可以用5-10倍于常用量的沖擊法，加入高濃度抗生素后作用24-48小時，再換入常規(guī)培養(yǎng)液，有時可能有效。推薦用量：慶大霉素 200ug/ml ,四環(huán)素10ug/ml ，卡那霉素50ug/ml 。對于支原體污染抗生素應用，預防性應用比污染后使用好。
2 加溫除菌：根據(jù)支原體耐熱性能差的特點。將受支原體污染的細胞置于41度中作用5-10小時可以殺滅支原體。但由于41度對培養(yǎng)細胞本身也有較大的影響，故處理前，應先進行預試驗，確定出最大限度殺傷支原體而對細胞影響較小的處理時間。