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125I標記單克隆抗體技術
同位素標記是一種重要的抗體標記技術，牨977年Yalow等在放射免疫測定法所作突出貢獻而獲得醫(yī)學和生理學諾貝爾獎。McAb標記同位素后除應用于放射免疫測定外，還可用于競爭結合試驗、體內腫瘤定位等。
一 原理
氯胺桾即對甲苯碘氯胺鈉，在水溶液中生成次氯酸，為一種溫和氧化劑，當加入到有蛋白質和碘的弱堿水溶液中，可將I２氧化為I＋并結合到氨基酸上。如標記條件溫和，標記后的McAb仍具有良好的結合活性，通過放射性同位素強度的測定可反映相應抗原的含量。
二 方法
在細胞凍存管內加入純化的McAb100μg／100μl，
再加入10μl 0.05M磷酸緩沖液
再加入10μl含1mCi125I
↓
加入10μl氯胺-T5mg／ml溶于0.05M
磷酸鹽緩沖液，孵育時間不超過30秒
↓
加入100μl偏重亞硫酸鈉1.2mg／ml溶于
0.05M磷酸緩沖液
↓
加入200μl KI溶液少許結晶KI溶于0.05M
磷酸緩沖液＋4％牛血清白蛋白
↓
用PD10柱Sephadex G25除去游離125I
用4％BSA PBS洗脫
↓
分部收集，0.5ml／管
每管取5μl進行γ計數，計算標記抗體的比活性和標記率
結合于McAb１２５I放射性強度cpm
標記率％＝───────────────────
總放射性強度cpm
結合于某一管McAb上的放射性強度
比活性μCi／μgMcAb＝────────────────
某一管McAb總量
三 試劑器材
1. 純化后的McAb
2. 0.05M磷酸緩沖液，氯胺桾，偏重亞硫酸鈉，KI，BSA
3. 125I
4. 有通風裝置的超凈臺，γ計數儀
5. PD10柱Sephadex G25
四 注意事項
1. 嚴防同位素污染，工作人員必須穿著工作衣，戴口罩、帽子、手套。必須在嚴密的通風櫥或通風超凈臺中操作。操作前后對實驗室環(huán)境進行監(jiān)測。所用125I和標記物應妥善保管。
2. 如標記細胞因子、激素等，應選用更溫和的標記方法，使保持更好的生物學活性。
