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1.細菌保存于穿刺培養物中：一般細菌保存于穿刺培養物可以維持兩年。具體方法如下：用滅菌接種針挑取分散良好的單菌落，針緩慢穿過瓊脂到達瓶底，連續幾次，蓋上瓶蓋擰緊，做好標記。室溫下存放于暗處。（最好一點可以將瓶蓋放松，在適當溫度下培養過夜，再擰緊瓶蓋并加封Parafilm膜，室溫或最好在4度避光保存）。
2.細菌保存于含有甘油的培養物中：
（1）在液體培養基中生長的細菌培養物：取0.85ml細菌培養物，加入0.15ml高壓滅菌甘油，振蕩培養物使甘油分布均勻，然后轉移到標記好的保存管內，密封，在乙醇－干冰或液氮中凍結后再轉至－70度長期保存。在復蘇時，用滅菌接種針刮取凍結的培養物表面，然后立即把黏附于接種針上的細菌劃于含適當抗生素(antibiotic)的LB瓊脂平板表面，于37度過夜。
（2）在瓊脂平板上生長的細菌培養物：從瓊脂平板表面刮下細菌放入裝有2mlLB的無菌試管內，再加入等量的含有30％滅菌甘油的LB培養基，振蕩使甘油完全分布均勻后，分裝于無菌保存管內，密封，再按前述方法冰凍保存。這一方法的優點在于可用于保存在質粒載體上建立的cDNA文庫。
2.細菌保存于含有甘油的培養物中：
（1）在液體培養基中生長的細菌培養物：取0.85ml細菌培養物，加入0.15ml高壓滅菌甘油，振蕩培養物使甘油分布均勻，然后轉移到標記好的保存管內，密封，在乙醇－干冰或液氮中凍結后再轉至－70度長期保存。在復蘇時，用滅菌接種針刮取凍結的培養物表面，然后立即把黏附于接種針上的細菌劃于含適當抗生素(antibiotic)的LB瓊脂平板表面，于37度過夜。
（2）在瓊脂平板上生長的細菌培養物：從瓊脂平板表面刮下細菌放入裝有2mlLB的無菌試管內，再加入等量的含有30％滅菌甘油的LB培養基，振蕩使甘油完全分布均勻后，分裝于無菌保存管內，密封，再按前述方法冰凍保存。這一方法的優點在于可用于保存在質粒載體上建立的cDNA文庫。
